实验一细菌形态观察和染色实验
实验一 细菌形态观察和染色实验
一、目的要求 学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操 作技术： 初步掌握革兰氏染色法； 巩固显微镜（油镜）的使用方法： 初步认识细菌的形态特征
一、目的要求 ❖ 学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操 作技术; ❖ 初步掌握革兰氏染色法; ❖ 巩固显微镜（油镜）的使用方法; ❖ 初步认识细菌的形态特征
二、基本原理 革兰 碘 乙 最 结晶紫初染 液媒染 醇脱色 红复染 终结果 原理 蓝紫色 蓝紫 蓝 蓝 细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类 紫色 脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、 色 色 网状结构孔径缩小，透性降低，结 晶紫一碘的复合物仍保留在细胞内 蓝紫色 细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高， 色 色 色 乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细 性菌 色 胞壁透性增大，结晶紫一碘的复合 (G) 物较易洗脱出来
二、基本原理 革兰 氏染 色程 序 结 晶 紫 初 染 碘 液 媒 染 乙 醇 脱 色 番 红 复 染 最 终 结 果 原理 革兰 氏阳 性菌 (G+ ) 蓝 紫 色 蓝 紫 色 蓝 紫 色 蓝 紫 色 蓝 紫 色 细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类 脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、 网状结构孔径缩小，透性降低，结 晶紫—碘的复合物仍保留在细胞内 革兰 氏阴 性菌 (G- ) 蓝 紫 色 蓝 紫 色 无 色 红 色 红 色 细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高， 乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细 胞壁透性增大，结晶紫—碘的复合 物较易洗脱出来
三、器材 菌种大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物 金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物， 枯草芽孢杆菌12~24h营养琼脂斜面培养 物。 染色剂革兰氏染色液。 仪器或者其他用具显微镜，酒精灯，载玻 片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲 苯)，擦镜纸，生理盐水等
三、器材 ❖ 菌种 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物， 金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物， 枯草芽孢杆菌12～24h营养琼脂斜面培养 物。 ❖ 染色剂 革兰氏染色液。 ❖ 仪器或者其他用具 显微镜，酒精灯，载玻 片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲 苯），擦镜纸，生理盐水等
四、操作步骤 现场演示 ÷涂片涂成薄膜 干燥 自然干燥 固定 通过火焰2~3次结 晶紫初染1-2min碘液媒染1min乙醇脱色 至流 出的乙醇无紫色番红复染2min油镜镜检观察。 ÷混合涂片涂色按上述方法，在同一载玻片上，以 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡萄 球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较
❖ 涂片 涂成薄膜 干燥 自然干燥 固定 通过火焰2～3次 结 晶紫初染 1-2min 碘液媒染 1min 乙醇脱色 至流 出的乙醇无紫色 番红复染 2min 油镜镜检观察。 四、操作步骤 ❖混合涂片涂色 按上述方法，在同一载玻片上，以 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡萄 球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。 现场演示