实验十 水中大肠菌群的 测定（综合性实验）
实验十 水中大肠菌群的 测定（综合性实验）
目的要求 ■1.学习测定水中大肠菌群数量的多管发 酵法。 ■ 2.了解大肠菌群的检测作为饮水卫生指 标的重要性
一、目的要求 ◼ 1．学习测定水中大肠菌群数量的多管发 酵法。 ◼ 2．了解大肠菌群的检测作为饮水卫生指 标的重要性
基本原理 多管发酵法包括初（步)发酵试验、平板分离和 复发酵试验三个部分。 1.初（步）发酵试验 发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置 一德汉氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多 细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产 酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内 加有溴甲酚紫作为pH指示剂，细菌产酸后，培养 基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制 其他细菌如芽胞菌生长的作用
二、基本原理 多管发酵法包括初（步）发酵试验、平板分离和 复发酵试验三个部分。 ◼ 1．初（步）发酵试验 发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置 一德汉氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多 细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产 酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内 加有溴甲酚紫作为pH指示剂，细菌产酸后，培养 基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制 其他细菌如芽胞菌生长的作用
水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时 内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色 改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果，但 也有个别其他类型的细菌在此条件下也可能产气； 此外产酸不产气的也不能完全说明是阴性结果。 在量少的情况下，也可能延迟到48小时后才产气， 此时应视为可疑结果，因此，以上两种结果均需 继续做下面两部分实验，才能确定是否是大肠菌 群。48小时后仍不产气的为阴性结果
水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时 内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色 改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果，但 也有个别其他类型的细菌在此条件下也可能产气； 此外产酸不产气的也不能完全说明是阴性结果。 在量少的情况下，也可能延迟到48小时后才产气， 此时应视为可疑结果，因此，以上两种结果均需 继续做下面两部分实验，才能确定是否是大肠菌 群。48小时后仍不产气的为阴性结果
2.平板分离 平板培养基一般使用复红亚硫酸钠琼脂 (远藤氏培养基，Endo's medium)或伊 红美蓝琼脂(eosin methylene blueagar, EMB agar),前者含有碱性复红染料，在此 作为指示剂，它可被培养基中的亚硫酸钠脱色 使培养基呈淡粉红色，大肠菌群发酵乳糖后产 生的酸和乙醛即和复红反应，形成深红色复合 物，使大肠菌群菌落变为带金属光泽的深红色。 亚硫酸钠还可抑制其他杂菌的生长
◼ 2．平板分离 平板培养基一般使用复红亚硫酸钠琼脂 （远藤氏培养基，Endo＇s medium）或伊 红美蓝琼脂（eosin methylene blueagar， EMB agar），前者含有碱性复红染料，在此 作为指示剂，它可被培养基中的亚硫酸钠脱色， 使培养基呈淡粉红色，大肠菌群发酵乳糖后产 生的酸和乙醛即和复红反应，形成深红色复合 物，使大肠菌群菌落变为带金属光泽的深红色。 亚硫酸钠还可抑制其他杂菌的生长