、通过转染/转导作用传递遗传物质 ()转染 病毒(含噬菌体)DNA及其重组子DNA导入宿主细 胞(或细菌)的过程称转染。 转导 以噬菌体为媒介,将外源DNA导入细菌的过程称转 原理:1.重组外源基因的噬菌体DNA,体外包装成噬菌 体,感染宿主菌,同时导入外源基因 2噬菌体的主动感染将含有外源DNA片段的重 组噬菌体DNA导入宿主菌体内
三、通过转染/转导作用传递遗传物质 ㈠ 转染 病毒（含噬菌体）DNA及其重组子DNA导入宿主细 胞（或细菌）的过程称转染。 ㈡ 转导 以噬菌体为媒介，将外源DNA导入细菌的过程称转 导。 原理：1.重组外源基因的噬菌体DNA, 体外包装成噬菌 体，感染宿主菌，同时导入外源基因。 2.噬菌体的主动感染将含有外源DNA片段的重 组噬菌体DNA导入宿主菌体内
第 转化子的筛选与鉴定 利用遗传标志的表型特征筛选 根据重组子的结构特征筛选
第二节 转化子的筛选与鉴定 一、利用遗传标志的表型特征筛选 二、根据重组子的结构特征筛选
利用遗传标志的表型特征筛选 ()由载体提供的性状进行筛选 1.抗菌素抗性标记筛选 2.抗性基因的插入失活筛选 3.β-半乳糖苷酶(LacZ)基因失活筛选法及其α 互补的原理 根据插入基因的遗传性状进行筛选 亮氨酸(Leu)缺陷菌在无Leu培养基中不生长,当含 Leu外源基因在此缺陷菌中表达时可生长,以此来筛选 阳性克隆
一、利用遗传标志的表型特征筛选 ㈠ 由载体提供的性状进行筛选 – 1. 抗菌素抗性标记筛选 – 2. 抗性基因的插入失活筛选 – 3. β-半乳糖苷酶（LacZ）基因失活筛选 法及其α- 互补的原理 ㈡ 根据插入基因的遗传性状进行筛选 亮氨酸（Leu)缺陷菌在无Leu培养基中不生长， 当含 Leu外源基因在此缺陷菌中表达时可生长，以此来筛选 阳性克隆
Ampr T B X B BR322 B B Ampr Amp' C B or orl Ampicillin抗性?yes yes Tetracycline抗性?No yes
Ampicillin 抗性? yes yes Tetracycline 抗性? No yes B X B B B X Ampr ori Ampr Tcr ori Ampr Tcr ori pBR322 B
transfer of colonies ampicillin ampicillin t tetracycline 这些克隆是有重组质粒的细菌
back transfer of colonies +ampicillin + ampicillin + tetracycline 这些克隆是有重组质粒的细菌