GNEis 重组DNA导入宿主细 胞与转化子的筛选?
重组DNA导入宿主细 胞与转化子的筛选?
第一节重组DNA向宿主细胞的导入 第二节转化子的筛选与鉴定 第三节目的基因序列测定
• 第一节 重组DNA向宿主细胞的导入 • 第二节 转化子的筛选与鉴定 • 第三节 目的基因序列测定
第一节重组DNA向宿主细 胞的导入 、转化 通过接合作用传递质粒DNA 三、通过转染转导作用传递遗传物质
第一节 重组DNA向宿主细 胞的导入 一、转化 二、通过接合作用传递质粒DNA 三、通过转染/转导作用传递遗传物质
、转化:以质粒作为克隆载体将目的基因导 入宿主细胞 1928年,美国的 Oswald, Avery首次开展了肺炎球菌的转 化试验 感受态细菌是指细菌处于容易接受外源DNA的 状态。有的细菌在生长周期任何时候自动产生如枯草、 嗜血杆菌。有的在对数生长期发生,如 E coli。产生机 制不明。一是原生质体假说,另一是酶受体假说。 转化作用就是一种基因型细胞(感受态细菌)从 周围介质中吸收来自另一种基因型细胞的DNA,进而 使原来细胞的遗传基因和遗传性发生相应变化的现象 常见转化方法有()原生质体转化法;化学转化法;(电 穿孔法
一、转化 : 以质粒作为克隆载体将目的基因导 入宿主细胞 1928年, 美国的Oswald, Avery 首次开展了肺炎球菌的转 化试验 感受态细菌是指细菌处于容易接受外源DNA的 状态。有的细菌在生长周期任何时候自动产生如枯草、 嗜血杆菌。有的在对数生长期发生，如E.coli。产生机 制不明。一是原生质体假说，另一是酶受体假说。 转化作用就是一种基因型细胞（感受态细菌）从 周围介质中吸收来自另一种基因型细胞的DNA, 进而 使原来细胞的遗传基因和遗传性发生相应变化的现象。 常见转化方法有㈠ 原生质体转化法； ㈡ 化学转化法； ㈢电 穿孔法
()原生质体转化法:除去细胞壁后加外源DNA,经 吸收恢复再生培养,如枯草杆菌。 (化学转化法:1970年 Mandel和Hga首先用CaCl2 经短暂的热休克后,可使外源DNA转入 E coli 1.原理:将对数生长期的细菌在0℃下,用预冷的 CaCL溶液低渗处理,以使菌体的细胞壁和细胞膜 通透性增加,菌体膨胀成球形。DNA易于进入细 菌的细胞内。 用冷CaC2低渗处理Ecoi使菌体成球形, 外源DNA可形成抗 DNase的羟基-钙磷酸复合物而 被吸附,经短暂42℃热休克,易于进入胞内而不 被降解,转化效率达105-106,它与菌株(hsdR) 2方法 1)感受态细菌的制备(2)转化
㈠ 原生质体转化法:除去细胞壁后加外源DNA，经 吸收恢复再生培养，如枯草杆菌。 ㈡ 化学转化法: 1970年Mandel和Higa首先用CaCl2 经短暂的热休克后，可使外源DNA转入E.coli。 1.原理：将对数生长期的细菌在0℃下, 用预冷的 CaCl2溶液低渗处理, 以使菌体的细胞壁和细胞膜 通透性增加, 菌体膨胀成球形。DNA易于进入细 菌的细胞内 。 用冷CaCl2低渗处理E.coli使菌体成球形， 外源DNA可形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物而 被吸附，经短暂42℃热休克，易于进入胞内而不 被降解，转化效率达105 -106，它与菌株（hsdR- ). 2.方法 : （1）感受态细菌的制备 （2）转化