二、基因工程的基本程序 剪切 载体质粒 选出含有重 引入宿 →组DNA的细 主细胞 胞扩增表达 外源DNA片段外源DNA插入
二、基因工程的基本程序 载体质粒 外源DNA片段 外源DNA插入 剪切 引入宿 主细胞 选出含有重 组DNA的细 胞扩增表达 a b b A A b
第五章分子克隆常用的工具酶 第一节限制性核酸内切酶与DNA 分子的体外切制 第二节DNA接酶和DNA分子的 体外连接 第三节其他工具
第五章 分子克隆常用的工具酶 第一节 限制性核酸内切酶与DNA 分子的体外切割 第二节 DNA连接酶和DNA分子的 体外连接 第三节 其他工具酶
第一节限制性核酸内切酶与DNA 分子的体切割 限制性核酸内切酶,是一类能够识别双链 DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切 割DNA双链结构的核酸内切酶。 寄主控制的限制与修饰作用如图2 限制性核酸内切酶的制备方法 限制性核酸内切酶分类和命名 四、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 ●五、影响限制性内切酶活性的因素
第一节 限制性核酸内切酶与DNA 分子的体切割 限制性核酸内切酶，是一类能够识别双链 DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切 割DNA双链结构的核酸内切酶。 ⚫ 一、寄主控制的限制与修饰作用如图2-1，图2- 2 ⚫ 二、限制性核酸内切酶的制备方法 ⚫ 三、限制性核酸内切酶分类和命名 ⚫ 四、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 ⚫ 五、影响限制性内切酶活性的因素
分类:IIⅢ Ⅰ:识别和切割位点不固定,随机性。 Ⅲ:核酸内切酶活性和甲基化活性是 不分开的。 Ⅱ:能在识别位点处切割DNA,切割位 点固定。核酸内切酶活性和甲基化活性 是分开的。常用
分类： Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ ：识别和切割位点不固定，随机性。 Ⅲ ：核酸内切酶活性和甲基化活性是 不分开的。 Ⅱ：能在识别位点处切割DNA，切割位 点固定。核酸内切酶活性和甲基化活性 是分开的。常用
四、工型限制性核酸内切酶的基本特性 识别序列:1.4~7个核苷酸组成的特定核苷酸序 列 回文结构:两个顺序相同的拷贝 在DNA链上呈反向排列 ECoR I 5,-GlAATTC-3 3-CTTAA G-5
四、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 识别序列 ：1.4~7个核苷酸组成的特定核苷酸序 列 2.回文结构：两个顺序相同的拷贝 在DNA链上呈反向排列。 EcoRⅠ 5 ’-G AATTC-3 ’ 3 ’-CTTAA G-5 ’