第七章核酸分子杂交 核酸分子杂交是指具有一定同源序列的两条核酸 单链在一定条件下按碱基互补配对原则退火形成异 质双链的过程,即来源不同的两条单链核酸分子通过 碱基互补可形成异源双螺旋,称为核酸分子杂交 (hybridization)o 具有灵敏度高、特异性强等优点 主要用于特异DNA或RNA的定性、定量检测
第七章 核酸分子杂交 核酸分子杂交是指具有一定同源序列的两条核酸 单链在一定条件下按碱基互补配对原则退火形成异 质双链的过程, 即来源不同的两条单链核酸分子通过 碱基互补可形成异源双螺旋，称为核酸分子杂交 (hybridization)。具有灵敏度高、特异性强等优点， 主要用于特异DNA或RNA的定性、定量检测
第一节核酸分子杂交的基本原理 第二节核酸探针 第三节核酸分子杂交技术
•第一节 核酸分子杂交的基本原理 •第二节 核酸探针 •第三节 核酸分子杂交技术
第一节核酸分子杂交的基本原理 DNA和DNA链、RNA与DNA链或两条RNA链之间 只要具有一定的互补序列均可在适当的条件下发生杂 交。常用已知的DNA或RNA的片段作为探针,包括 特异的DNA序列,或转录的RNA序列或cDNA序列, 或人王合成的寡核苷酸片段 根据支持物的不同,分为固相杂交和液相杂交。 固相杂交又包括膜上印迹杂交和细胞原位杂交两种。 膜上印迹杂交即将核酸从细胞中分离纯化后,在体外 与探针杂交,细胞原位杂交是在细胞内进行的交
第一节 核酸分子杂交的基本原理 DNA和DNA链、RNA与DNA链或两条RNA链之间， 只要具有一定的互补序列均可在适当的条件下发生杂 交。常用已知的DNA或RNA的片段作为探针，包括 特异的DNA序列，或转录的RNA序列或cDNA序列， 或人工合成的寡核苷酸片段。 根据支持物的不同，分为固相杂交和液相杂交。 固相杂交又包括膜上印迹杂交和细胞原位杂交两种。 膜上印迹杂交即将核酸从细胞中分离纯化后，在体外 与探针杂交，细胞原位杂交是在细胞内进行的杂交
第二节核酸探针 核酸探针是指带有放射性同位素、生物素或其他 活性物质标记的某种特定的DNA或RNA片段。 核酸探针的类型 ()基因组DNA探针 用克隆化的基因片段作探针应尽可能选用基因的编 码序列(外显子) cDNA探针 与mRNA互补的DNA链称cDNA,特异性高,是 种较理想的核酸探针
第二节 核酸探针 核酸探针是指带有放射性同位素、生物素或其他 活性物质标记的某种特定的DNA或RNA片段。 一、核酸探针的类型 ㈠ 基因组DNA探针 用克隆化的基因片段作探针应尽可能选用基因的编 码序列(外显子)。 ㈡ cDNA探针 与mRNA互补的DNA链称cDNA，特异性高，是 一种较理想的核酸探针
RNA探针 RNA探针有下述优点: ①杂交体的稳定性高,杂交反应条件严格,特异性更 高 ②RNA单链不存在双链DNA探针的互补双链的复性 杂交效率较高。 ③RNA无高度重复序列,非特异杂交少。 ④杂交后用RNa消化未杂交的RNA探针,可降低杂 交本底
㈢ RNA探针 RNA探针有下述优点： ①杂交体的稳定性高，杂交反应条件严格，特异性更 高。 ②RNA单链不存在双链DNA探针的互补双链的复性， 杂交效率较高。 ③RNA无高度重复序列，非特异杂交少。 ④杂交后用RNase消化未杂交的RNA探针，可降低杂 交本底