3)细胞器DNA的分离植物组织一用核分离缓冲液匀浆过滤—滤液离心(2000g,10,4℃)→核缓冲液使核裂解(含0.5%TritonX-100)→抽提DNA植物组织一细胞器缓冲液匀浆一离心(100g10°,4℃)除去细胞核—→离心(1800g,10,4℃)分离叶绿体离心(10,000g,10°,4℃)分离线粒体→DNase除去细胞器外DNA一加入EDTA使DNase失活纯化细胞器细胞器裂解一提取DNA2.载体DNA的分离与纯化1)质粒载体DNA的分离关键：如何使质粒DNA与宿主染色体DNA分开原理：质粒DNA比染色体DNA小得多，在DNA抽提过程中，染色体DNA断裂成小片段（线状），质粒DNA仍保持超螺旋构型
2. 载体DNA的分离与纯化 1) 质粒载体DNA的分离 关键：如何使质粒DNA与宿主染色体DNA分开 原理：质粒DNA比染色体DNA 小得多，在DNA抽提过程中， 染色体DNA断裂成小片段(线状)，质粒DNA仍保持超螺旋构型 3) 细胞器DNA的分离 植物组织 用核分离缓冲液匀浆 过滤 滤液离心(2000g, 10’,4℃) 核缓冲液使核裂解(含0.5%Triton X-100) 抽提 DNA 植物组织 细胞器缓冲液匀浆 离心(100g, 10’,4℃)除去细胞 核 离心(1800g, 10’,4℃)分离叶绿体 离心(10,000g, 10’,4℃) 分离线粒体 DNase除去细胞器外DNA 加入EDTA使 DNase失活 纯化细胞器 细胞器裂解 提取DNA
方法：i.超速离心：利用两种DNA分子的大小和空间构型ii.变性法：在变性条件下使染色体DNA变为单链，而质粒DNA仍保持环状结构，当变性条件发生迅速变化时，前者仍不能复性而后者又可回复到天然构型变性条件可采用加热煮沸法或碱变性法上述方法亦可用于ss环状病毒DNARF型的分离，质粒DNA的氯霉素扩增使用并不广泛（菌株和载体）2）噬菌体载体DNA的分离纯净病毒颗粒病毒载体DNAM13mp载体可采用质粒DNA的分离方法
方法： ⅰ. 超速离心：利用两种DNA分子的大小和空间构型 ⅱ. 变性法：在变性条件下使染色体DNA变为单链，而质粒DNA 仍保持环状结构，当变性条件发生迅速变化时，前者仍不能复性， 而后者又可回复到天然构型。 变性条件可采用加热煮沸法或碱变性法 上述方法亦可用于ss环状病毒DNA RF型的分离, 质粒DNA的氯霉 素扩增使用并不广泛（菌株和载体） 2) 噬菌体载体DNA的分离 纯净病毒颗粒 病毒载体DNA M13mp载体可采用质粒DNA的分离方法
二、RNA的分离与纯化1.制备RNA的关键一防止内外源RNaSe的作用1）RNase的特点：抗酸抗碱,具很广pH作用范围；抗高温严寒(0~65℃均具活性）；抗变性剂解决办法：外源RNaSe一高温，焦磷酸二乙酯(DEPC)处理20所有溶液（Tris·HCI除外）和器皿，操作者带手套内源RNase一高温抽提，强蛋白质变性剂RNase抑制剂，蛋白酶K等2.总RNA的制备根据所用蛋白质变性剂种类不一样分为以下三种制备方法热苯酚抽提法胍盐法：异硫氰酸胍和硫氰酸胍LiCV尿素法3
二、RNA的分离与纯化 1. 制备RNA的关键—防止内外源RNase的作用 1) RNase的特点：抗酸抗碱,具很广pH作用范围; 抗高温严 寒(0~65℃均具活性）；抗变性剂 2) 解决办法：外源RNase—高温，焦磷酸二乙酯(DEPC)处理 所有溶液（Tris·HCl除外）和器皿，操作者带手套 内源RNase—高温抽提，强蛋白质变性剂， RNase抑制剂，蛋白酶K等 2. 总RNA的制备 根据所用蛋白质变性剂种类不一样分为以下三种制备方法： 1）热苯酚抽提法 2）胍盐法：异硫氰酸胍和硫氰酸胍 3）LiCl/尿素法