实验四.基因的PCR扩增实验目的：1、了解PCR反应原理：2、掌握PCR扩增的基本操作步骤
实验四.基因的PCR扩增 实验目的： 1、了解PCR反应原理； 2、掌握PCR扩增的基本操作步骤
（PCR）五要素聚合酶链式反应·引物决定待扩增基因片段的特异性酶Taq DNA聚合酶dNTP模板双链DNA缓冲液(内含Mg2+)
聚合酶链式反应（PCR）五要素 • 引物 决定待扩增基因片段的特异性 • 酶 Taq DNA聚合酶 • dNTP • 模板 双链DNA • 缓冲液（内含Mg2+)
引物浓度不宜偏高，否则：·容易形成引物二聚体·容易产生非特异性产物。一般终浓度用0.1~0.5pmol/ul（μM）较好。贮存液：100 μM工作液：10μM
引物浓度不宜偏高，否则： • 容易形成引物二聚体 • 容易产生非特异性产物。 一般终浓度用0.1~0.5 pmol/μl(μM )较好。 贮存液：100 μM 工作液：10 μM
·本实验用Tag DNA聚合酶1、延伸速度：2~4kb/min2、延伸长度：<6kb70~75℃3、最佳反应温度：4、最佳Mg2+浓度：1~2mMVMg2+过高，非特异性增强；过低，Taq DNA聚合酶活性减少5、3'加A，便于TA克隆酶的浓度也要适中，过低过高都不好
• 本实验用Taq DNA聚合酶 1、延伸速度： 2~4kb/min 2、延伸长度： <6kb 3、最佳反应温度： 70~75℃ 4、最佳Mg2+ 浓度：1~2mM ➢ Mg2+过高，非特异性增强； 过低， Taq DNA聚合酶活性减少 5、3’加A，便于 TA克隆 酶的浓度也要适中，过低过高都不好
·dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP的混合物1.等摩尔浓度配制，否则就会引起错配2.每种dNTP 50～200μmol/L3.浓度过高会抑制PCR反应：与Mg2+螯合
• dNTP：dATP、 dTTP、 dCTP、 dGTP的 混合物 1.等摩尔浓度配制，否则就会引起错配 2.每种dNTP 50～200μmol/L 3.浓度过高会抑制PCR反应：与Mg2+ 螯合