三、基因重组蛋白包涵体的分离和复性
三、 基因重组蛋白包涵体的分离和复性
外源基因在大肠杆菌中的表达形式细胞质细胞周质位于细胞外表达产物包涵体蛋白形式融合蛋白整合型外源蛋白分泌型外源蛋白
外源基因在大肠杆菌中的表达形式 位于 细胞质 细胞周质 细胞外 表达产物 形式 包涵体蛋白 融合蛋白 整合型外源蛋白 分泌型外源蛋白
细胞质中表达：外源基因在大肠杆菌寄主细胞质中高效表达时，常会发生一种特殊的生理现象，形成包涵体。包涵体：存在于细胞质中的一种由不可溶性蛋白质聚集折叠而成的晶体结构物
细胞质中表达: 外源基因在大肠杆菌寄主细胞质中高效表达时，常会 发生一种特殊的生理现象，形成包涵体。 包涵体：存在于细胞质中的一种由不可溶性蛋白质聚 集折叠而成的晶体结构物
包涵体表达形式的优点在一定程度上保持表达产物的结构稳定能够避免细胞内蛋白水解酶的作用，有利于目标蛋白的富集简化外源基因表达产物的分离操作包涵体的水难溶性及其密度远大于其它细胞碎片和细胞成分，菌体经超声波裂解后，直接通过高速离心即可将重组异源蛋白从细菌裂解物中分离出来能够表达对大肠杆菌宿主有毒或有致死效应的目标蛋白
包涵体表达形式的优点 在一定程度上保持表达产物的结构稳定 能够避免细胞内蛋白水解酶的作用，有利于目标蛋白的富集 简化外源基因表达产物的分离操作 包涵体的水难溶性及其密度远大于其它细胞碎片和细胞成分，菌 体经超声波裂解后，直接通过高速离心即可将重组异源蛋白从细 菌裂解物中分离出来 能够表达对大肠杆菌宿主有毒或有致死效应的目标蛋白
包涵体表达形式的缺点以包涵体形式表达的重组蛋白丧失了原有的生物活性，必须通过有效的变性复性操作，才能得到有正确空间构象的目标蛋白。体外复性蛋白质的成功率相当低，一般不超过30%复性处理工艺可使目标蛋白的制备成本上升
包涵体表达形式的缺点 以包涵体形式表达的重组蛋白丧失了原有的生物活性，必须通过 有效的变性复性操作，才能得到有正确空间构象的目标蛋白。 体外复性蛋白质的成功率相当低，一般不超过30% 复性处理工艺可使目标蛋白的制备成本上升