111遗传检测法1111111111/11111111111E181.根据载体表型特征选择重组体分子1S_2.根据插入序列表型特征选择重组体分子1111福11?清?11稻/1111111-1111E11111
一、 遗传检测法 § 1．根据载体表型特征选择重组体分子 § 2．根据插入序列表型特征选择重组体分子
根据载体表型特征选择重组体分子S载体分子，都带有一个可选择的遗传标记或表型特征。根据载体分子的遗传特征进行选择，是获得重组体DNA分子细胞群体的必不可少的条件之一S（1)抗生素抗性基因插入失活选择法1S(2)β-半乳糖苷酶显色反应选择法
1．根据载体表型特征选择重组体分子 § 载体分子，都带有一个可选择的遗传标记或表型特 征。根据载体分子的遗传特征进行选择，是获得重 组体DNA分子细胞群体的必不可少的条件之一。 § (1) 抗生素抗性基因插入失活选择法 § (2) β-半乳糖苷酶显色反应选择法
(1)抗生素抗性基因插入失活选择S检测外源DNA插入作用的一种通用的方法是插人失-活效应(insertional inactivation)1S适用于带有抗生素抗性基因的克隆载体，将外源DNA插入到抗生素抗性基因序列内，该基因就失活设计一套含抗生素平板，可筛选出重组子。S四环素抗性基因(tet)和氨苄青霉素抗性基因(ampl)等11
(1)抗生素抗性基因插入失活选择 § 检测外源DNA插入作用的一种通用的方法是插人失 活效应(insertional inactivation)。 § 适用于带有抗生素抗性基因的克隆载体，将外源 DNA插入到抗生素抗性基因序列内，该基因就失活。 设计一套含抗生素平板，可筛选出重组子。 § 四环素抗性基因(tetr )和氨苄青霉素抗性基因(ampr ) 等
1111pBR3221111ClalEcORIHindill特点：EcoRVBamHIS多种抗药标记0SphlSallPvulTetS分子量低：4363bpPstl.Xmalll1NrulS 高拷贝1.1多单酶切位点Q3S不影响复制2Ori11111
pBR322 特点： § 多种抗药标记 § 分子量低：4363bp § 高拷贝 § 多单酶切位点 § 不影响复制
pBR322抗菌素标记选择11（1）四环素：1抑制细菌生长，但不杀死细菌1（2）氨苄青霉素抗性基因：产生口-内酰胺酶，使氨芒青霉素转变为青霉酮酸，使碘-青霉素指示液反（I2-KI-Aampicillin）（蓝灰色）褪色1一景1福1111（3）环丝氨酸FA1杀死生长的细菌，但不杀死停止生长的细菌
（1）四环素： （2）氨苄青霉素抗性基因： pBR322抗菌素标记选择 产生-内酰胺酶，使氨苄青霉素转变为青霉 酮酸，使碘-青霉素指示液（I2-KIAampicillin）（蓝灰色）褪色。 抑制细菌生长，但不杀死细菌。 杀死生长的细菌，但不杀死停止生长的细菌。 （3）环丝氨酸：