食品论坛 http://bbs.foodmate.net 表6-2 外源化学物急性毒性分级(WHO) 6只大鼠吸入4小时 毒性分级 大鼠一次经口LD50 死亡2～4只 兔经皮LD50 对人可能致死剂量 (mg/kg) 的浓度(ppm) (mg/kg) g/kg (g/60kg) 剧毒 ＜1 ＜10 ＜5 ＜0.05 0.1 高毒 1～ 10～ 5～ 0.05～ 3 中等毒 50～ 100～ 44～ 0.5～ 30 低毒 500～ 1000～ 350～ 5～ 25 微毒 50000～ 10000～ 2180～ ＞15 ＞1000 表6-3 我国食品毒理急性毒性分级法[1994] 急性毒性分级 大鼠经口LD50(mg/kg) 大致相当于体重为70kg人的致死剂量 6级(极毒) ＜1 稍尝，＜7滴 5级(剧毒) 1～50 7滴～1茶匙 4级(中等毒) 51～500 1茶匙～35克 3级(低毒) 501～5000 35～350克 2级(实际无毒) 5001～15000 350～1050克 1级(无毒) ＞15000 ＞1050克 四、急性毒性试验的其他方法 1. 近似致死剂量的研究 在确定近似致死剂量的研究中，仅用6只动物，每只动物给以 不同剂量的受试物，每个剂量间距为l.5倍。这种实验设计可以得到近似最小致死剂量。利用 该方法测试了87种化学物，发现83％的化学物近似致死剂量都位于用经典的急性毒性试验方 案所得到的LD50的正、负30％范围以内。 另一种确定近似致死剂量的方法是先选择一个剂量给予2只动物，24小时后，观察动物 的情况，然后再根据动物反应确定下一个给药剂量；如果动物未死亡，以第一次给药剂量的 1.5倍剂量再次给予2只动物;如果动物死亡，则以第一次给药剂量的2／3再次给予2只动物。 重复操作一直到确定最大非致死剂量和最小致死剂量。 2. 固定剂量法(fixed dose Procedure) 固定剂量法是由英国毒理学会1984年提出，OECD于1992年正式采用。这种方法与以往 方法不同的是它不以动物死亡作为观察终点，这个方法可以利用预先选定的或固定的一系列 剂量染毒，从而观察化学物的毒性反应来对化学物的毒性进行分类及分级。实验选择的剂量 范围是5、50和500mg/kg，而最高限量是2000mg/kg。首先用50mg/kg的受试物给予10只实验 动物(雌、雄各半)。如果存活率低于100％，则再选择一组动物给予5mg/kg的受试物。如果 存活率仍低于100％，则将该受试物归于“高毒”类，反之归于“有毒”类。如果给予50mg/kg 受试物后存活率为100％，但有毒性表现，则不需进一步试验而将其归于“有害”类。如果给 予50mg/kg后存活率为100％，而且没有毒性表现，继续给另外一组动物500mg/kg的受试物， 如果存活率仍为100％，而且没有毒性表现时，则给予2000mg/kg受试物进行观察，如果仍 然100％存活，将受试物归于“无严重急性中毒的危险性”类。对于固定剂量法的结果评价可 见表6-4。 OECD组织了对固定剂量法国际性的验证(Van Den Heuvel l990)，11个国家的33个实验 室用固定剂量法和OECD(1981)规定的经典急性毒性试验法进行实验。实验结果表明，①毒 性分级：比较了30个化合物的两种试验法所得结果，根据欧共体急性口服毒性的分级标准， 516次固定剂量法试验中，有414次实验结果的毒性分级与LD50的分级相同，一致性为80.2％
食品论坛 http://bbs.foodmate.net 表6-2 外源化学物急性毒性分级(WHO) 6只大鼠吸入4小时 毒性分级 大鼠一次经口LD50 死亡2～4只 兔经皮LD50 对人可能致死剂量 (mg/kg) 的浓度(ppm) (mg/kg) g/kg (g/60kg) 剧毒 ＜1 ＜10 ＜5 ＜0.05 0.1 高毒 1～ 10～ 5～ 0.05～ 3 中等毒 50～ 100～ 44～ 0.5～ 30 低毒 500～ 1000～ 350～ 5～ 25 微毒 50000～ 10000～ 2180～ ＞15 ＞1000 表6-3 我国食品毒理急性毒性分级法[1994] 急性毒性分级 大鼠经口LD50(mg/kg) 大致相当于体重为70kg人的致死剂量 6级(极毒) ＜1 稍尝，＜7滴 5级(剧毒) 1～50 7滴～1茶匙 4级(中等毒) 51～500 1茶匙～35克 3级(低毒) 501～5000 35～350克 2级(实际无毒) 5001～15000 350～1050克 1级(无毒) ＞15000 ＞1050克 四、急性毒性试验的其他方法 1. 近似致死剂量的研究 在确定近似致死剂量的研究中，仅用6只动物，每只动物给以 不同剂量的受试物，每个剂量间距为l.5倍。这种实验设计可以得到近似最小致死剂量。利用 该方法测试了87种化学物，发现83％的化学物近似致死剂量都位于用经典的急性毒性试验方 案所得到的LD50的正、负30％范围以内。 另一种确定近似致死剂量的方法是先选择一个剂量给予2只动物，24小时后，观察动物 的情况，然后再根据动物反应确定下一个给药剂量；如果动物未死亡，以第一次给药剂量的 1.5倍剂量再次给予2只动物;如果动物死亡，则以第一次给药剂量的2／3再次给予2只动物。 重复操作一直到确定最大非致死剂量和最小致死剂量。 2. 固定剂量法(fixed dose Procedure) 固定剂量法是由英国毒理学会1984年提出，OECD于1992年正式采用。这种方法与以往 方法不同的是它不以动物死亡作为观察终点，这个方法可以利用预先选定的或固定的一系列 剂量染毒，从而观察化学物的毒性反应来对化学物的毒性进行分类及分级。实验选择的剂量 范围是5、50和500mg/kg，而最高限量是2000mg/kg。首先用50mg/kg的受试物给予10只实验 动物(雌、雄各半)。如果存活率低于100％，则再选择一组动物给予5mg/kg的受试物。如果 存活率仍低于100％，则将该受试物归于“高毒”类，反之归于“有毒”类。如果给予50mg/kg 受试物后存活率为100％，但有毒性表现，则不需进一步试验而将其归于“有害”类。如果给 予50mg/kg后存活率为100％，而且没有毒性表现，继续给另外一组动物500mg/kg的受试物， 如果存活率仍为100％，而且没有毒性表现时，则给予2000mg/kg受试物进行观察，如果仍 然100％存活，将受试物归于“无严重急性中毒的危险性”类。对于固定剂量法的结果评价可 见表6-4。 OECD组织了对固定剂量法国际性的验证(Van Den Heuvel l990)，11个国家的33个实验 室用固定剂量法和OECD(1981)规定的经典急性毒性试验法进行实验。实验结果表明，①毒 性分级：比较了30个化合物的两种试验法所得结果，根据欧共体急性口服毒性的分级标准， 516次固定剂量法试验中，有414次实验结果的毒性分级与LD50的分级相同，一致性为80.2％
食品论坛 http://bbs.foodmate.net ②毒性反应：从毒性反应的类别、出现和持续的时间、消失的时间等方面分析，两种试验方 法未显出明显差别。③实验所用动物数：LD50经典急性毒性试验，平均每个化合物用大鼠24.2 只，固定剂量法平均用大鼠14.8只，明显比前者少。 表6-4 单次口服固定剂量法试验结果的评价 剂 量 试 验 结 果 （mg/kg） 存活率〈100% 100%存活，毒性表现明显 100%存活，无明显中毒表现 5.0 高毒LD50≤25mg/kg 有毒 用50mg／kg试验 50.0 有毒或高毒 有害 用500mg/kg试验 用5mg/kg试验 LD50200～2000mg/kg 500.0 有毒或有害 LD50＞2000mg/kg 用2000mg/kg试验 用50mg/kg试验 2000.0 用500mg/kg试验 该化学物无严重急性中毒的危险性 3. 急性毒性分级法(acute toxic class method) 传统的急性毒性试验方法以死亡为终点，而固定剂量法以明显的毒性体征作终点。 OECD(1996)急性经口毒性分级法是分阶段试验法，每阶段3只动物，根据死亡动物数，平均 经2～4阶段即可判定急性毒性。所用动物少，仍可得到可接受的结论，此法基于生物统计学， 并经过OECD组织的国际证实研究(Schlede等，1994)。此法应用于啮齿类，首选大鼠，利用 3个固定剂量25、200、2000mg/kg体重其中之一开始进行试验，根据实验结果： ①不需要进一步试验进行分级；②下一阶段以相同剂量的另一种性别试验；③下一阶段 以较高或较低的剂量水平进行(从200mg/kg体重开始的程序见图6-3)。于确认染毒动物存活 后，进行下一个性别或下一个剂量的实验。动物观察14天，染毒当天观察体征和死亡至少两 次，之后每日观察一次。染毒前和每周测体重，所有动物均进行大体解剖，必要时进行组织 病理学检查
食品论坛 http://bbs.foodmate.net ②毒性反应：从毒性反应的类别、出现和持续的时间、消失的时间等方面分析，两种试验方 法未显出明显差别。③实验所用动物数：LD50经典急性毒性试验，平均每个化合物用大鼠24.2 只，固定剂量法平均用大鼠14.8只，明显比前者少。 表6-4 单次口服固定剂量法试验结果的评价 剂 量 试 验 结 果 （mg/kg） 存活率〈100% 100%存活，毒性表现明显 100%存活，无明显中毒表现 5.0 高毒LD50≤25mg/kg 有毒 用50mg／kg试验 50.0 有毒或高毒 有害 用500mg/kg试验 用5mg/kg试验 LD50200～2000mg/kg 500.0 有毒或有害 LD50＞2000mg/kg 用2000mg/kg试验 用50mg/kg试验 2000.0 用500mg/kg试验 该化学物无严重急性中毒的危险性 3. 急性毒性分级法(acute toxic class method) 传统的急性毒性试验方法以死亡为终点，而固定剂量法以明显的毒性体征作终点。 OECD(1996)急性经口毒性分级法是分阶段试验法，每阶段3只动物，根据死亡动物数，平均 经2～4阶段即可判定急性毒性。所用动物少，仍可得到可接受的结论，此法基于生物统计学， 并经过OECD组织的国际证实研究(Schlede等，1994)。此法应用于啮齿类，首选大鼠，利用 3个固定剂量25、200、2000mg/kg体重其中之一开始进行试验，根据实验结果： ①不需要进一步试验进行分级；②下一阶段以相同剂量的另一种性别试验；③下一阶段 以较高或较低的剂量水平进行(从200mg/kg体重开始的程序见图6-3)。于确认染毒动物存活 后，进行下一个性别或下一个剂量的实验。动物观察14天，染毒当天观察体征和死亡至少两 次，之后每日观察一次。染毒前和每周测体重，所有动物均进行大体解剖，必要时进行组织 病理学检查