第二节菌体载体 噬菌体的一般生物学特 二、λ噬菌体载体 三、粘性质粒 ●四、单链DNA噬菌体载体
第二节 噬菌体载体 ⚫ 一、噬菌体的一般生物学特性 ⚫ 二、λ噬菌体载体 ⚫ 三、粘性质粒 ⚫ 四、单链DNA噬菌体载体
●烈性噬菌体 ●温和噬菌体 ●溶源化细菌 溶源化 ●原噬菌体
⚫ 烈性噬菌体 ⚫ 温和噬菌体 ⚫ 溶源化细菌 ⚫ 溶源化 ⚫ 原噬菌体
λ噬菌体载体 )DNA分子 ●(1)噬菌体基因结构:如图3-1、 ●Cos位点( Cohesive-end site):λDNA为 线状双链分子,两端各有12个碱基的单 链互补粘性末端,通过粘性末端的互补 作用形成双链环形DNA。这种由粘末端 结合形成的双链区段即Cos位点 (2)λ噬菌体DNA的复制
二、λ噬菌体载体 ⚫ （一） λ DNA分子 ⚫ (1) λ噬菌体基因结构：如图3-11、3-12 ⚫ Cos位点（Cohesive-end site）： λDNA为 线状双链分子，两端各有12个碱基的单 链互补粘性末端，通过粘性末端的互补 作用形成双链环形DNA。这种由粘末端 结合形成的双链区段即Cos位点。 ⚫ (2) λ噬菌体DNA的复制
●(二)λ噬菌体的类型 ●插入型载体 ●替换型载体 (三)λ噬菌体载体的应用 ●1转染作用 ●转染:由宿主细胞捕获噬菌体或病毒DNA的过程 ●转导:以噬菌体为媒介转移遗传物质的过程。 转化:质粒等外源DNA引入细胞的过程。 2.DNA的体外包装
⚫ （二）λ噬菌体的类型 ⚫ 插入型载体 ⚫ 替换型载体 ⚫ ( 三 ) λ噬菌体载体的应用 ⚫ 1.转染作用 ⚫ 转染：由宿主细胞捕获噬菌体或病毒DNA的过程。 ⚫ 转导：以噬菌体为媒介转移遗传物质的过程。 ⚫ 转化：质粒等外源DNA引入细胞的过程。 ⚫ 2. λ DNA的体外包装
(四)常用λ噬菌体 ●凯伦噬菌体载体 ●这类载体有插入型的,如 Charon2;也有 替换型的,如 Charon30。在基因操作中 用途很广。 ● Charon载体上具有适当数量的限制酶切 位点,带有来自大肠杆菌的β-半乳糖苷 酶基因acZ(中央区段)。插入基因经包 装后,可通过蓝/斑筛选阳性克隆。 ● Charon载体的特点是容量大,对研究大 范围内的染色体结构很有用处
⚫ （四） 常用λ噬菌体 ⚫ 凯伦噬菌体载体 ⚫ 这类载体有插入型的，如Charon2；也有 替换型的，如Charon30。在基因操作中 用途很广。 ⚫ Charon载体上具有适当数量的限制酶切 位点，带有来自大肠杆菌的β-半乳糖苷 酶基因lacZ（中央区段）。插入基因经包 装后，可通过蓝/白斑筛选阳性克隆。 ⚫ Charon载体的特点是容量大，对研究大 范围内的染色体结构很有用处