四、大肠杆菌质粒载体 ●1.pSC10质粒载体 ●2.pBR32质粒载体 分别由pMB1(ori)、pSF2124(Amp)和 pSC101(Tet)三种质粒通过载体改造后形成, 使之具有松弛型ori和Amp及Tet两种抗性 基因的理想的基因克隆载体。 Amp(Scal、PvuI、Pst切点) Tet( EcoRI、Nhel、 BamhI、SphI、 HindIi切点)
四、大肠杆菌质粒载体 ⚫ 1． pSC101质粒载体 ⚫ 2．pBR322质粒载体 – 分别由pMB1 (ori)、pSF2124(Ampr ) 和 pSC101(Tetr ) 三种质粒通过载体改造后形成， 使之具有松弛型ori和Ampr及Tetr两种抗性 基因的理想的基因克隆载体。 Ampr （Scal、PvuI、PstI切点 ） Tetr （EcoRI、Nhel、BamHI、SphI、 HindIII切点 ）
五、多种功能的衍生质粒的组建 (→)、带有不同种类抗性因的质粒 载体 ●(二)、高拷贝数质粒pAT153 三)、正选择质粒 (四)、多功能质粒-PUC质粒
五、多种功能的衍生质粒的组建 ⚫ （一）、带有不同种类抗性基因的质粒 载体 ⚫ （二）、高拷贝数质粒pAT153 ⚫ （三）、正选择质粒 ⚫ （四）、多功能质粒-PUC质粒
带有不同种类抗性基因的质粒 载体 ●pBR328是从pBR322改建成的质粒,大小 为4907Kb,它具有Amp、Tet和Cm基因 Cm基因有 ECORI、PvuⅡ和Ba的单一酶 切位点。除了pBR328外,pBR325也有类 似结构
带有不同种类抗性基因的质粒 载体 ⚫ pBR328是从pBR322改建成的质粒，大小 为4.907kb,它具有Ampr 、Tetr和Cmlr基因。 Cmlr基因有EcoRI、PvuⅡ和BalI的单一酶 切位点。除了pBR328外，pBR325也有类 似结构
●pAT153是由pBR322 ECOR I 质粒改造而成,这种 Sca l HindⅢ 质粒的拷贝数比 Bamhi Pyu I A mpf Tet pBR322高1.5~3倍。 它的大小是36kb,选 Pst I 3. 6kb 择标记有氨苄青霉素 Sat i O 抗性基因Amp和四环 素抗性基因Tet、单 切点的限制性内切 图37质粒pAT153 核酸酶有PvuI 的结构 PstI、 BamH I ScaI、SalI ECoR I、 HindI
⚫ pAT153是由pBR322 质粒改造而成，这种 质粒的拷贝数比 pBR322高1.5～3倍。 它的大小是3.6kb,选 择标记有氨苄青霉素 抗性基因Ampr和四环 素抗性基因Tetr、单 一切点的限制性内切 核酸酶有PvuⅠ、 PstⅠ、BamHⅠ、 ScaⅠ、SalⅠ、 EcoRⅠ、HindⅢ
正选择质粒 ●pTR262是正选择质粒。在这种质粒中,在四环 素的抗性基因(Tet)前有λ噬菌体的P启动子 同时在这种载体中还带有λ噬菌体编码CI蛋白 质(阻遏物)的基因。没有外源基因插入时, 由于CI蛋白质阻遏从P进行的转录作用,因此 对四环素不表现抗性。在CI蛋白质基因上有单 的Hind和BclI切点,若利用其中任何 个切点插入外源DNA片段,都可以使CI蛋白质 基因功能丧失,结果P激活Te基因表达;表 现出对四环素的抗性,达到正选择的效果
正选择质粒 ⚫ pTR262是正选择质粒。在这种质粒中，在四环 素的抗性基因（Tetr）前有λ噬菌体的PR启动子， 同时在这种载体中还带有λ噬菌体编码CI蛋白 质（阻遏物）的基因。没有外源基因插入时， 由于CI蛋白质阻遏从PR进行的转录作用，因此 对四环素不表现抗性。在CI蛋白质基因上有单 一的HindⅢ和BclⅠ切点，若利用其中任何一 个切点插入外源DNA片段，都可以使CI蛋白质 基因功能丧失，结果PR激活Tetr基因表达；表 现出对四环素的抗性，达到正选择的效果