第八章聚合酶链反应 1985年PE-ctu公司的人类遗传研究室Muli等人发 明了具有划时代意义的聚合酶链式反应( polymerase chain reaction,PCR)。此技术能够特异地扩增任何所希望的目 的基因或DNA片段。在基础和临床医学、法医、考古等 方面有重要的应用价值,并对分子生物学技术的发展给予 巨大的推动
第八章 聚合酶链反应 1985年PE-cetus公司的人类遗传研究室Mullis等人发 明了具有划时代意义的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)。此技术能够特异地扩增任何所希望的目 的基因或DNA片段。在基础和临床医学、法医、考古等 方面有重要的应用价值，并对分子生物学技术的发展给予 巨大的推动
第一节PCR原理与特点 第二节PCR类型 第三节PCR技术在医学上的应用
•第一节 PCR原理与特点 •第二节 PCR类型 •第三节 PCR技术在医学上的应用
PCR的基本原理 在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件—模板DNA 寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合适的缓冲液系统和DNA变性、复 性及延伸的温度与时间等,使目的DNA得以迅速扩增(图8-1)。 基因组DNA 94℃,300s 引物 Taq dna聚合酶72℃,60s 94℃,60 55℃,60s 72℃,60s 72℃,60s 30次循环 图81PCR技术原理示意
一、PCR的基本原理 在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件——模板DNA， 寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲液系统和DNA变性、复 性及延伸的温度与时间等，使目的DNA得以迅速扩增(图8-1)
()DNA模板变性 双链DNA是通过94℃左右的高温使其发生变性,形成 单链DNA。 模板与引物退火 将合成的两个寡核苷酸引物分别与待扩增DNA两端的 序列互补。通过控制退火条件,引物就能准确地与扩增区 域的两端配对。 白引物延伸 在4种dNTP底物及Mg2+存在条件下,DNA聚合酶在最 适作用温度可将单核苷酸从引物3‘端掺入,沿模板延伸合 成新股DNA,每一循环的产物可作为下一循环的模板
㈠ DNA模板变性 双链DNA是通过94℃左右的高温使其发生变性，形成 单链DNA。 ㈡ 模板与引物退火 将合成的两个寡核苷酸引物分别与待扩增DNA两端的 序列互补。通过控制退火条件，引物就能准确地与扩增区 域的两端配对。 ㈢ 引物延伸 在4种dNTP底物及Mg2+存在条件下，DNA聚合酶在最 适作用温度可将单核苷酸从引物3′端掺入，沿模板延伸合 成新股DNA，每一循环的产物可作为下一循环的模板
以上所述的变性、退火、延伸“三步曲”被确定为 PCR的一轮循环,整个PCR过程一般需进行三十轮的循 环 按2η的指数方式递增,PCR扩增量应达到230个拷贝 平台效应”出现的迟早主要取决于起始模板的拷贝数 所用的DNA聚合酶的性能及底物dNTP的浓度等多种因素
以上所述的变性、退火、延伸“三步曲”被确定为 PCR的一轮循环，整个PCR过程一般需进行三十轮的循 环。 按2 n的指数方式递增， PCR扩增量应达到2 30个拷贝， “平台效应”出现的迟早主要取决于起始模板的拷贝数、 所用的DNA聚合酶的性能及底物dNTP的浓度等多种因素