第九章的基因的分离和克隆 第一节目的基因的获得 第二节获得目的基因方法的选择 第三节且的基因重组体的构建
第九章 目的基因的分离和克隆 • 第一节 目的基因的获得 • 第二节 获得目的基因方法的选择 • 第三节 目的基因重组体的构建
第一节且的基因的获得 一、化学合成 聚合酶链反应(PCR)方法扩增目 的基因 三、建立基因组DNA文库 四、构建cDNA文库筛选目的基因 五、其他方法
第一节 目的基因的获得 • 一、化学合成 • 二、聚合酶链反应（PCR）方法扩增目 的基因 • 三、建立基因组DNA文库 • 四、构建cDNA文库筛选目的基因 • 五、其他方法
化学合成法自动化DNA合成仪 1要求:1)已知目的基因的核苷酸序列或其对 应的多肽链氨基酸序列 2)较短的DNA片段,有专一性和定 向性 2原理:第一个核苷酸固定于不溶性的固相载 体上,然后按预定顺序从该核苷酸开始,以3 5-磷酸二酯键与另一核苷酸进行缩合反应(封 闭非反应基团),其后用洗涤法除去多余的反 应物和副产物,再用同样的步骤与下一个核苷 酸进行缩合反应,如此循环将合成的寡核苷酸 链从载体上洗脱下来,解除保护基,进一步纯化
一、化学合成法 自动化 DNA合成仪 • 1.要求：1）已知目的基因的核苷酸序列或其对 应的多肽链氨基酸序列 • 2）较短的DNA片段，有专一性和定 向性 • 2.原理：第一个核苷酸固定于不溶性的固相载 体上, 然后按预定顺序从该核苷酸开始，以3’、 5’-磷酸二酯键与另一核苷酸进行缩合反应（封 闭非反应基团 ），其后用洗涤法除去多余的反 应物和副产物, 再用同样的步骤与下一个核苷 酸进行缩合反应, 如此循环将合成的寡核苷酸 链从载体上洗脱下来, 解除保护基, 进一步纯化
应用范围:1)合成PCR引物 2)寡核苷酸探针 3)人工接头及较小的基因
• 应用范围：1）合成PCR引物 • 2）寡核苷酸探针 • 3）人工接头及较小的基因
、建立基因组DNA文库 基因组文库:分离真核生物中某种DNA成分 通常是分离供体细胞中的染色体DNA,酶 切后,将这些染色体DNA片段与某种载体 相接,而后转入大肠杆菌,建立包含有真 核细胞染色体DNA片断的克隆株,这种克 隆株群体 1.特点:提供全套遗传信息,即完整的基因组 DNA,可以研究基因组中5端控制基因转录 的调控序列,内含子的分布和作用,以及重 复序列的数量分布及大小
二、建立基因组DNA文库 基因组文库：分离真核生物中某种DNA成分, 通常是分离供体细胞中的染色体DNA，酶 切后，将这些染色体DNA片段与某种载体 相接，而后转入大肠杆菌，建立包含有真 核细胞染色体DNA片断的克隆株, 这种克 隆株群体。 1.特点：提供全套遗传信息, 即完整的基因组 DNA,可以研究基因组中5’端控制基因转录 的调控序列, 内含子的分布和作用, 以及重 复序列的数量分布及大小