Chapter 3 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme 酶的分离纯化 制作:郑穗平
Chapter 3 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme 酶的分离纯化 制作：郑穗平
●●● ●●●● ●●●● ●●●● ●●●●● Contents of chapter 3 ●●●● 01、酶的提取与分离纯化技术路线 2、细胞破碎 c0>3、酶的提取 04、酶的分离方法 5、酶的组合分离纯化策略 6、酶的浓缩、干燥与结晶
Contents of chapter 3 1、酶的提取与分离纯化技术路线 2、细胞破碎 3、酶的提取 4、酶的分离方法 Go Go Go Go Go 5、酶的组合分离纯化策略 Go 6、酶的浓缩、干燥与结晶
●●● ●●●● ●●●● ●●●● ●●●●● 细胞结构与酶分布 ●●●● Plant Cell Structure Cell wall chloroplasts Plasma me mbrane Plasmo- Central vacuole Mitochondrion Bacterial Cell Structure Ribosome L Gol Nuclear DNA apparatus envelope Ribosomes Nucleus Rough Nucleolus endoplasm Smooth Flagellum endoplasmic reticulum Cytoplasm Animal Cell Structure Capsule golgi Microvilli apparatus lasma Cell wall Cytoskeleton membrane Plasma Centriole membrane Smooth endoplasmic reticulum Nuclear. Ribosomes envelope Mitochon- drion Nucleolus- plasmic Nucleus reticulum Cytoma
细胞结构与酶分布
●●● ●●●● ●●●● ●●●● 0●●●● 3.1酶的提取、分离纯化技术路线 ●●●● 细胞破碎口动物、植物或微生物细胞 酶提取 发酵液 酶分离纯化 酶浓缩 离心分离,过滤分离,沉淀分 酶贮存 离,层析分离,电泳分离,萃 取分离,结晶分离等
3.1 酶的提取、分离纯化技术路线 细胞破碎 酶提取 酶分离纯化 酶浓缩 酶贮存 动物、植物或微生物细胞 发酵液 离心分离，过滤分离，沉淀分 离，层析分离，电泳分离，萃 取分离，结晶分离等
A純化階段 B分析方法 酶分离纯化不同阶段 Material Background knowdedge about Mat erial 酶的纯化过程,约可分为 Protein/ Adivity assay Extraction 三个阶段: Protein (1)粗蛋白质( crude Electroph fractionation Native-PAGE protein):采样→均质 Ampniumsu胞at DS PAGE Organc solent Gradient Page 打破细胞→抽出全蛋白 多使用盐析沉淀法;可以 Chromatography Kinetic study Molecular weight Gel filtration Sedimentation coefficent 粗略去除蛋白质以外的物 determinati on 州 nity chomatography 质 Isoelectric focusing Electrophoresis Peptide mapping (2)部分纯化 repa atie electophoresis (partially purified): 初步的纯化,使用各钟柱 Pure enzyme Amino acid analysis Amino acid sequencing Extinct on coefficient 层析法。 Antibody production b Immunoassays (3)均质酶 Monocbral or coventional antibodies Immunoblotting ( homogeneous):目标酶 Double diffusion 的进一步精制纯化,可用 Crystal b/X-Ray crystallography Immunoeledropharesis 制备式电泳或HPLC。 Spectroscopic methods CD ORd, NMR&e ESR
酶的纯化过程，约可分为 三个阶段： (1) 粗蛋白质 (crude protein): 采样 → 均 质 打破细胞 → 抽出全蛋白， 多使用 盐 析沉淀 法；可以 粗略去除蛋白质以外的物 质。 (2) 部分纯化 (partially purified): 初步的纯化，使用各钟 柱 层析法 。 (3) 均质酶 (homogeneous): 目标酶 的进一步精制纯化，可用 制备 式电泳 或 HPLC 。 酶分离纯化不同阶段 本章 目录