●●● ●●●● ●●●● ●●●● 32细胞破碎 0●●●● ●●●● 许多酶存在于细胞内。JY92mD超声波 为了提取这些胞内酶, 首先需要对细胞进行破 细胞粉碎机 碎处理。 高压细胞破碎机 1)机械破碎 2)物理破碎 3)化学破碎 4)酶解破碎 DY89-型电动玻璃匀浆机 细胞破碎珠
3.2 细胞破碎 许多酶存在于细胞内。 为了提取这些胞内酶， 首先需要对细胞进行破 碎处理。 1）机械破碎 2）物理破碎 3）化学破碎 4）酶解破碎 JY92-II D超声波 细胞粉碎机 细 胞 破 碎 珠 高 压 细 胞 破 碎 机 DY89-I型电动玻璃匀浆机
●●● 细胞破碎方法及其原理 ●●●● ●●●● ●●●● 0●●●● 机械破碎 通过机械运动产生的剪切 捣碎法 ●●●● 力,使组织、细胞破碎。 研磨法 匀浆法 通过各种物理因素的作用 温度差破碎法 物理破碎 使组织、细胞的外层结构破 压力差破碎法 坏,而使细胞破碎。 超声波破碎法 有机溶剂: 化学破碎 通过各种化学试剂对细胞 膜的作用,而使细胞破碎 甲苯、丙酮 丁醇、氯仿 表面活性剂: Triton、 Tween 通过细胞本身的酶系或外 酶促破碎 加酶制剂的催化作用,使 自溶法 细胞外层结构受到破坏, 外加酶制剂法 而达到细胞破碎
机械破碎 捣碎法 研磨法 匀浆法 物理破碎 温度差破碎法 压力差破碎法 超声波破碎法 化学破碎 有机溶剂： 甲苯、丙酮 丁醇、氯仿 表面活性剂： Triton、Tween 酶促破碎 自溶法 外加酶制剂法 通过机械运动产生的剪切 力，使组织、细胞破碎。 通过各种物理因素的作用， 使组织、细胞的外层结构破 坏，而使细胞破碎。 通过各种化学试剂对细胞 膜的作用，而使细胞破碎 通过细胞本身的酶系或外 加酶制剂的催化作用，使 细胞外层结构受到破坏， 而达到细胞破碎 细胞破碎方法及其原理 本章 目录
●●● ●●●● ●●●● ●●●● ●●●●● 3.3酶的提取 ●●●● ●酶的提取是指在一定的条件下,用适当的溶剂或溶液处理含酶原料, 使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。也称为酶的抽提。 酶提取时首先应根据酶的结构和溶解性质,选择适当的溶剂。一般说 来,极性物质易溶于极性溶剂中,非极性物质易溶于非极性的有机溶 剂中,酸性物质易溶于碱性溶剂中,碱性物质易溶于酸性溶剂中 酶都能溶解于水,通常可用水或稀酸、稀碱、稀盐溶液等进行提取, 有些酶与脂质结合或含有较多的非极性基团,则可用有机溶剂提取 提高温度,降低溶液粘度、增加扩散面积、縮短扩散距离,增大浓 度差等都有利于提高酶分子的扩散速度,从而增大提取效果。 为了提高酶的提取率并防止酶的变性失活,在提取过程中还要注 意控制好温度、p值等提取条件
⚫ 酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂或溶液处理含酶原料， 使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。也称为酶的抽提。 ⚫ 酶提取时首先应根据酶的结构和溶解性质，选择适当的溶剂。一般说 来，极性物质易溶于极性溶剂中，非极性物质易溶于非极性的有机溶 剂中，酸性物质易溶于碱性溶剂中，碱性物质易溶于酸性溶剂中。 ⚫ 酶都能溶解于水，通常可用水或稀酸、稀碱、稀盐溶液等进行提取， 有些酶与脂质结合或含有较多的非极性基团，则可用有机溶剂提取。 3.3 酶的提取 提高温度，降低溶液粘度、增加扩散面积、縮短扩散距离，增大浓 度差等都有利于提高酶分子的扩散速度，从而增大提取效果。 为了提高酶的提取率并防止酶的变性失活，在提取过程中还要注 意控制好温度、pH值等提取条件
●●● ●●●● 酶的主要提取方法 ●●●● ●●●● 0●●●● ●●●● 提取方法使用的溶剂或溶液 提取对象 盐溶液提取0.02~0.5πol/的盐溶用于提取在低浓度盐溶液中溶解度 液 较大的酶 酸溶液提取PH2~6的水溶液 用于提取在稀酸溶液中溶解度大, 且稳定性较好的酶 碱溶液提取PH8~12的水溶液 用于提取在稀碱溶液中溶解度大且 稳定性较好的酶 有机溶剂提取可与水混溶的有机溶剂用于提取那些与脂质结合牢固或含 有较多非极性基团的酶 Salting-in 大多数蛋白类酶都溶于水,而 且在低浓度的盐存在的条件下 onic strength 酶的溶解度随盐浓度的升高而 分子在其等范贴時·容易互相吸引+聚台成沉澱:加入 增加,这称为盐溶现象 雕子會破道些吸引力·使分子散開·溶入水中
酶的主要提取方法 提取方法 使用的溶剂或溶液 提取对象 盐溶液提取 0.02～0.5mol/L的盐溶 液 用于提取在低浓度盐溶液中溶解度 较大的酶 酸溶液提取 PH2～6的水溶液 用于提取在稀酸溶液中溶解度大， 且稳定性较好的酶 碱溶液提取 PH8～12的水溶液 用于提取在稀碱溶液中溶解度大且 稳定性较好的酶 有机溶剂提取 可与水混溶的有机溶剂 用于提取那些与脂质结合牢固或含 有较多非极性基团的酶 大多数蛋白类酶都溶于水，而 且在低浓度的盐存在的条件下， 酶的溶解度随盐浓度的升高而 增加，这称为盐溶现象。 本章 目录
●●● ●●●● ●●●● ●●●● ●●●●● 34酶的分离方法 ●●●● 01、沉淀分离 00)2、离心分离 G0)3、过滤与膜分离 G04、层析分离 05、电泳分离 )6、萃取分离
3.4 酶的分离方法 1、沉淀分离 2、离心分离 3、过滤与膜分离 4、层析分离 Go Go Go Go Go 5、电泳分离 Go 6、萃取分离 本章 目录