(1)cu-互补-a complementation LacZ和lacZ基因的互补 lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操 纵基因区段的B半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补 是 7
7 (1) -互补- complementation LacZ’ 和lacZ基因的互补 lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操 纵基因区段的-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补
(LacZ'基因 插入片段 N端序列) (LacZ基因失活) LacZ基因 C端序列 LacZ酶 函 8
8 （LacZ’基因 N端序列） 插入片段 （LacZ’基因失活） LacZ基因 C端序列 LacZ酶
Ecc01092674 BstAPl 179 Aatll 2617 Ndel 183 Sspl 2501 Ehel 235 Pdml 2294 Bcgl 2215 2486 146/ 236/ lacZ MCS Scal 2177 469 pUC18/19 Sapl 683 2686bp 852 Aflll,BspLU111 806 Gs川1784 1626 G10I1779 1466 Ec031l1766 Ea110511694 Tep (pMB1) Cail 1217 9
9 pUC18/19
Ssp I Xmn11937 2142 Aat Il Sca|1818 2260 N Nde l T7↓ 2509 1 start Nar I EcoR I Amp 2561 Sac l 15 Kpn I 1 Ava I 21 Xmal 1 pGEM@-3Z Smal 23 Vector BamH I 6 (2743bp) Xbal 32 Sall 3 AccI 3 Hinc II 40 PstI Sph I 54 Hind II1 6 ↑SP6 69 ori A5:2)1120 T7和SP6启动子特异性地由噬菌体DNA编码的RNA聚合酶所 识别，因此相应的受体菌必须表达噬菌体RNA聚合酶。 10
10 T7和SP6启动子特异性地由噬菌体DNA编码的RNA聚合酶所 识别，因此相应的受体菌必须表达噬菌体RNA聚合酶
f1(+)origin138-444 f1 (+ori B-galactosidase a-fragment 463-816 multiple cloning site 653-760 lac promoter 817-938 ampicillin pUC origin 1158-1825 lacZ ampicillin resistance (bla)ORF 1976-2833 Kpn I pBluescript SK+ MCS 3.0kb -SacI TP lac pBS SK+ pUC ori pBluescript SK(+/-)Multiple Cloning Site Region (sequence shown 601-826) T7 Promoter Kpn I A8d1091 粉o1 TTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGTCGACGGT. M13-20 primer binding site T7 primer binding site KS primer binding site. 2tp1061 Hindll EcoRV EcoRI Pl Smal BamH I Spel Xbal .ATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGGGGGATCCACTAGTTCTAGAGCGGCCGCCACCGCGGTGGAGCTCCA. KS primer binding site SK primer binding site T3 Promoter B-gal a-fragment .GCTTTTGTTCCCTTTAGTGAGGGTTAATTTCGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCC T3.prmer binding site M13 Reverse primer binding site
11 pBS SK+