常用的RNA酶(RNase)抑制剂 (1)DEPC(二乙基焦碳酸盐)(C2H50CO0CO0C2H5) 粘性液体，很强的核酸酶抑制剂。 作用机制：通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白 质变性，从而抑制酶的活性。 使用注意： 1)DEPC也能破坏单链核酸中大部分腺嘌呤环。但浓度比使蛋白 质变性的浓度大100~1000倍。 2)容易降解，保存在4℃或液氮中； 3)提RNA时，0.1%DEPC浸泡器皿37C2h。 4)剧毒
常用的RNA酶（RNase)抑制剂 （1） DEPC(二乙基焦碳酸盐) (C2H5OCOOCOOC2H5) 粘性液体，很强的核酸酶抑制剂。 作用机制：通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白 质变性，从而抑制酶的活性。 使用注意： 1）DEPC也能破坏单链核酸中大部分腺嘌呤环。但浓度比使蛋白 质变性的浓度大100～1000倍。 2）容易降解，保存在4 ℃或液氮中； 3）提RNA时，0.1% DEPC浸泡器皿37℃ 2 h。 4）剧毒
(2)皂土(bentonite):皂土带负电荷，能吸附RNase,使 其失活。 (3)异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在 裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸 从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。 (4)RNase阻抑蛋白(RNasin)：从大鼠肝或人胎盘中提取 得来的酸性糖蛋白。是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和 多种RNA酶结合，使其失活。 （5)氧铜核糖核苷复合物(Vanady-Ribonucleoside Complex,VRC):由氧化铜离子和核苷形成的复合物它和RNA 酶结合形成过渡态物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性
（2）皂土（bentonite）：皂土带负电荷，能吸附RNase，使 其失活。 （3）异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在 裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸 从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。 （4）RNase阻抑蛋白（RNasin）：从大鼠肝或人胎盘中提取 得来的酸性糖蛋白。是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和 多种RNA酶结合，使其失活。 （ 5 ） 氧 铜 核 糖 核 苷 复 合 物 (Vanadyl-Ribonucleoside Complex, VRC)：由氧化铜离子和核苷形成的复合物它和RNA 酶结合形成过渡态物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性
二、RNA提取的通用方法 异硫氰酸胍/苯酚法 硅胶膜纯化法
二、RNA提取的通用方法 ❑ 异硫氰酸胍/苯酚法 ❑ 硅胶膜纯化法
异硫氰酸弧/苯酚法 原 理： 细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下被裂解，同时核蛋白体 上的蛋白变性，核酸释放； 释放出来的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度的不同而 分别位于整个体系中的中间相和水相，从而得以分离； ,有机溶剂抽提，沉淀，得到纯净RNA
❑ 异硫氰酸胍/苯酚法 ➢ 原 理： • 细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下被裂解，同时核蛋白体 上的蛋白变性，核酸释放； • 释放出来的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度的不同而 分别位于整个体系中的中间相和水相，从而得以分离； • 有机溶剂抽提，沉淀，得到纯净RNA
用 步骤： 材料准备：尽量新鲜。 裂解变性：异硫氰酸胍 使细胞及核蛋白复合物变性，释放RNA,有效抑制核酸酶。 纯化分离：苯酚，氯仿，异戊醇。 沉淀：异丙醇、无水乙醇，可用氯化锂选择沉淀RNA。 乙酸钠（pH4.0)：维持变性的细胞裂解液的pH值，沉淀 RNA. 洗涤：70%乙醇
➢ 步 骤: • 材料准备：尽量新鲜。 • 裂解变性：异硫氰酸胍 使细胞及核蛋白复合物变性，释放RNA，有效抑制核酸酶。 • 纯化分离：苯酚，氯仿，异戊醇。 • 沉淀：异丙醇、无水乙醇，可用氯化锂选择沉淀RNA。 乙酸钠（pH4.0）：维持变性的细胞裂解液的pH值，沉淀 RNA。 • 洗涤：70％乙醇