导 3.基因表达载体的构建过程： 首先用一定的 切割载体，使它出现一个切口；然 后用同种限制酶或能产生 的限制酶切割含有 的DNA片段；再利用 将目的基因 片段拼接到载体的切口处，形成一个 分子。 微思考1目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的部位在 哪里？ 提示：目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的部位是启 动子
导航 3.基因表达载体的构建过程: 首先用一定的 限制酶 切割载体,使它出现一个切口;然 后用同种限制酶或能产生 相同末端 的限制酶切割含有 目的基因 的DNA片段;再利用 DNA连接酶 将目的基因 片段拼接到载体的切口处,形成一个 重组DNA 分子。 微思考1目的基因表达时,RNA聚合酶识别和结合的部位在 哪里? 提示:目的基因表达时,RNA聚合酶识别和结合的部位是启 动子
导航 三、将目的基因导入受体细胞 1.导入植物细胞。 (1)常用： 法。 (2)我国独创： 法。 2.导入动物细胞。 (1)方法： 技术。 (2)常用受体细胞：
导航 三、将目的基因导入受体细胞 1.导入植物细胞 。 (1)常用 : 农杆菌转化 法。 (2)我国独创 : 花粉管通道 法。 2.导入动物细胞 。 (1)方法 : 显微注射 技术。 (2)常用受体细胞 : 受精卵
导 3.导入微生物细胞。 ()常用方法：先用 处理受体细胞，使细胞处于一种 能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基 因表达载体导入其中。 (2)常用受体细胞：原核细胞，最广泛的是 细胞。 微判断1将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注 射技术。（√）
导航 3.导入微生物细胞。 (1)常用方法:先用 Ca2+ 处理受体细胞,使细胞处于一种 能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,然后再将重组的基 因表达载体导入其中。 (2)常用受体细胞:原核细胞,最广泛的是 大肠杆菌 细胞。 微判断1将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注 射技术。( √ )
四、目的基因的检测与鉴定 1分子水平的检测。 通过 等技术检测生物体的染色体DNA上是 否插入了目的基因或检测目的基因是否转录出了 (2)从转基因生物体中提取蛋白质，用相应的抗体进行 ,检测目的基因是否翻译成相应的蛋白质 等。 2.个体生物学水平的鉴定。 例如，通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫来确定B基因是否 赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度
四、目的基因的检测与鉴定 导航 1.分子水平的检测。 (1)通过 PCR 等技术检测生物体的染色体DNA上是 否插入了目的基因或检测目的基因是否转录出了 mRNA 。 (2)从转基因生物体中提取蛋白质,用相应的抗体进行 抗原—抗体杂交 ,检测目的基因是否翻译成相应的蛋白质 等。 2.个体生物学水平的鉴定。 例如,通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否 赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度
微思考2基因工程操作的四个步骤中，哪些步骤没有发生碱 基互补配对？ 提示：只有第三步“将目的基因导入受体细胞”没有发生碱基 互补配对。第一步，碱基互补配对发生在PCR扩增目的基因 的过程中。第二步，碱基互补配对发生在目的基因片段相互 拼接的过程中。第四步，碱基互补配对发生在目的基因的导 入检测和转录检测过程中。 微判断2抗虫基因即使成功地插入植物细胞染色体上，也未 必能正常表达。（√）
导航 微思考2基因工程操作的四个步骤中,哪些步骤没有发生碱 基互补配对? 提示:只有第三步“将目的基因导入受体细胞”没有发生碱基 互补配对。第一步,碱基互补配对发生在PCR扩增目的基因 的过程中。第二步,碱基互补配对发生在目的基因片段相互 拼接的过程中。第四步,碱基互补配对发生在目的基因的导 入检测和转录检测过程中。 微判断2抗虫基因即使成功地插入植物细胞染色体上,也未 必能正常表达。( √ )