(A)PYAC3 KEY CEN4 Centromere from yeast chromosome 4 SUP4 Origin of replication TRPI SUP4 S ble mark URA3URA3 11.4 kb
(B)Cloning with PYAC3 SnaBl Restrict with BamHI+ SnaBl Left arm Right arm B Ligate with blunt-ended insert DNA TRPI CEN URA3 Insert DNA Figure 4. 12 Working with a Yac
YAC的主要缺点 1.存在高比例的嵌合体,即一个YAC克隆 含有两个本来不相连的独立片段; 2.部分克隆子不稳定,在转代培养中可能 会发生缺失或重排; 3.难与酵母染色体区分开,因为YAC与酵 母染色体具有相似的结构。 4.操作时容易发生染色体机械切割
▪ YAC的主要缺点 1．存在高比例的嵌合体，即一个YAC克隆 含有两个本来不相连的独立片段； 2．部分克隆子不稳定，在转代培养中可能 会发生缺失或重排； 3．难与酵母染色体区分开，因为YAC与酵 母染色体具有相似的结构。 4．操作时容易发生染色体机械切割
以细菌寄主系统为基础的竞隆载体形成嵌合体的频率较低, 转化效率高,又易于分离。科学家用"染色体建造"法用F质 粒及其调控基因构建细菌载体,克隆大片段DNA。该质粒 主要包括ors,repE(控制F质粒复制)和parA、parB (控制拷贝数)等成分。 Hindi BamHI Xmal/s NotI/ EagI NotI/ Bgll/ sfil SacI COSN PBAC1 08 A detailed deseription of the con- struction is provided in Materiats and Methods. CMR, chloramben Icol resistance marker
▪ 以细 菌寄主系统为基础的克隆载体形成嵌合体的频率较低， 转化效率高，又易于分离。科学家用"染色体建造"法用F质 粒及其调控基因构建细菌载体，克隆大片段DNA。该质粒 主要包括oriS， repE（控制F质粒复制）和parA、 parB （控制拷贝数）等成分
BAC的优点 易于用电击法转化Eco(转化效率比转化酵 母高10-100倍); 2.超螺旋环状载体,易于操作; 3.F质粒本身所带的基因控制了质粒的复制; 4.很少发生体内重排。 有人把人类染色体端粒DNA上单个a-卫星DNA 单元多聚化形成1Mb左右的大片段并与人类基因 组DNA混合,产生了能被复制、能正常分裂并得 到长期稳定保存的人工合成的染色体,长度约为 6-10Mb,称为MAC或HAC
BAC的优点 1． 易于用电击法转化E.coli（转化效率比转化酵 母高10-100倍）； 2． 超螺旋环状载体，易于操作； 3． F'质粒本身所带的基因控制了质粒的复制； 4． 很少发生体内重排。 有人把人类染色体端粒DNA上单个α-卫星DNA 单元多聚化形成1Mb左右的大片段并与人类基因 组DNA混合，产生了能被复制、能正常分裂并得 到长期稳定保存的人工合成的染色体，长度约为 6-10Mb，称为MAC或HAC