试剂：二氯甲烷四、实验方法及步骤1.标准品溶液制备：用分析天平称量靛玉红和靛蓝标准品各约10mg，分别用二氯甲烷溶解于100mL和500mL容量瓶中，加入二氯甲烷至刻度，作为标准品的储备溶液。用移液管精密吸取靛玉红标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL放入10mL容量瓶中，加二氯甲烷至刻度。然后用移液管精密吸取靛蓝标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL放入10mL容量瓶中，加二氯甲烷至刻度。2.绘制标准曲线：用可见紫外分光光度计测定波长在530nm和640nm处测定7个浓度靛玉红标准溶液的吸收度，以靛玉红的浓度（mg/mL）为横坐标，AA（A530nm-A640mm）为纵坐标绘制标准曲线，经回归处理得到回归方程。测定波长在514nm和566nm处7个浓度蓝标准溶液的吸收度，同法得到靛蓝标准曲线的回归方程。3.样品溶液制备：用分析天平精密称取口腔溃疡散W=1.0g，用滤纸包裹后置入索氏提取器中，加二氯甲烷约300mL至出现虹吸，在水浴锅中回流提取至提取液无色，约2-3小时。过滤得提取液，残渣用二氯甲烷40mL分三次洗涤，合并洗涤液于旋转蒸发仪中，浓缩提取液后转入100mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。4.含量测定：用可见紫外分光光度计测定波长在530nm和640nm处样品溶液的吸收度，得到△A（A530nm-A640mm），用回归方程求出样品中靛玉红的含量。在514nm和566nm处测定样品溶液的吸收度，同法计算样品中靛蓝的含量。计算公式：含量（mg/g）=C×100/W五、思考题1.双波长分光光度法中如何选择入1（参比波长）和22（测量波长）2．建立标准曲线回归方程的意义在哪里？
6 试剂：二氯甲烷 四、 实验方法及步骤 1. 标准品溶液制备：用分析天平称量靛玉红和靛蓝标准品各约 10mg，分别用 二氯甲烷溶解于 100mL 和 500mL 容量瓶中，加入二氯甲烷至刻度，作为标 准品的储备溶液。用移液管精密吸取靛玉红标准溶液 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、 1.0、1.2mL 放入 10mL 容量瓶中，加二氯甲烷至刻度。然后用移液管精密吸 取靛蓝标准溶液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL 放入 10mL 容量瓶中， 加二氯甲烷至刻度。 2. 绘制标准曲线：用可见紫外分光光度计测定波长在 530nm 和 640nm 处测定 7 个浓度靛玉红标准溶液的吸收度，以靛玉红的浓度（mg/mL）为横坐标，△A （A530nm-A640nm）为纵坐标绘制标准曲线，经回归处理得到回归方程。测定 波长在 514nm 和 566nm 处 7 个浓度蓝标准溶液的吸收度，同法得到靛蓝标 准曲线的回归方程。 3. 样品溶液制备：用分析天平精密称取口腔溃疡散 W=1.0g，用滤纸包裹后置 入索氏提取器中，加二氯甲烷约 300mL 至出现虹吸，在水浴锅中回流提取 至提取液无色，约 2-3 小时。过滤得提取液，残渣用二氯甲烷 40mL 分三次 洗涤，合并洗涤液于旋转蒸发仪中，浓缩提取液后转入 100mL 容量瓶中， 定容至刻度，摇匀。 4. 含量测定：用可见紫外分光光度计测定波长在 530nm 和 640nm 处样品溶液 的吸收度，得到△A（A530nm-A640nm），用回归方程求出样品中靛玉红的含量。 在 514nm和 566nm处测定样品溶液的吸收度，同法计算样品中靛蓝的含量。 计算公式：含量（mg/g）=C 测×100/W 五、 思考题 1. 双波长分光光度法中如何选择1（参比波长）和2（测量波长） 2. 建立标准曲线回归方程的意义在哪里？
实验三高效液相色谱法（HPLC）测定口腔溃疡散中靛玉红的含量一、实验目的1．了解HPLC的工作原理及使用方法2.掌握HPLC外标方法测定中成药成分的含量实验原理二、HPLC是一种高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。高效液相色谱仪检测器81高压泵系统进样系统分离系统检测系统数据分析系统三、实验材料、仪器和试剂1.药品：口腔溃疡散（50g），靛玉红对照品（5mg）2.器材：HPLC、反相色谱柱、离心机、称量纸、10mL容量瓶、25mL容量瓶、移液器、3.试剂：分析级甲醇和纯净水四、实验方法及步骤1.优化色谱条件色谱柱：C18反相色谱柱（150mm×4.5um）柱温：室温流动相：甲醇：水=75：25流速：0.8mL/min检测波长：289nm2.标准曲线制作：精密称取靛玉红用甲醇配置浓度为0.01、0.02、0.03、0.04、7
7 实验三 高效液相色谱法（HPLC）测定口腔溃疡散中靛玉红的 含量 一、实验目的 1. 了解 HPLC 的工作原理及使用方法 2. 掌握 HPLC 外标方法测定中成药成分的含量 二、 实验原理 HPLC 是一种高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离 测定的色谱方法。 三、 实验材料、仪器和试剂 1. 药品：口腔溃疡散（50g），靛玉红对照品（5mg） 2. 器材： HPLC、反相色谱柱、离心机、称量纸、10mL 容量瓶、25mL 容量瓶、 移液器、 3. 试剂：分析级甲醇和纯净水 四、 实验方法及步骤 1. 优化色谱条件 色谱柱：C18 反相色谱柱（150mm×4.5um） 柱温：室温 流动相：甲醇：水=75：25 流速：0.8 mL/min 检测波长：289nm 2. 标准曲线制作： 精密称取靛玉红用甲醇配置浓度为 0.01、0.02、0.03、0.04