目录实验一：移液器使用.实验二：质粒DNA的限制性内切酶消化..9实验三：琼脂糖凝胶电泳检测DNA.....11实验四、五：目的片段的切胶回收与DNA重组..14.17实验六、七：大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.21实验八：（重组）质粒DNA的提取.实验九：PCR基因扩增技术筛选重组子.24实验十：外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测..26
目 录 实验一：移液器使用. 4 实验二：质粒DNA的限制性内切酶消化.9 实验三：琼脂糖凝胶电泳检测DNA.11 实验四、五：目的片段的切胶回收与 DNA 重组.14 实验六、七：大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.17 实验八：（重组）质粒 DNA 的提取.21 实验九：PCR 基因扩增技术筛选重组子.24 实验十：外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测.26
《分子生物学》实验课程简介适用专业生物技术、生物科学、生态学学时54学分课程性质必修预修课程生物化学、遗传学、微生物学、细胞生物学一。本课程的性质、地位和作用分子生物学实验是生物科学和生物技术专业的一门专业基础课程，是一门独立的实验课程，同时也是为了配合分子生物学的教学而开设的。实验过程中，首先将有关的基本原理、基本技术和方法给学生做一介绍，然后将分子生物学实验中要用到的仪器以课件的形式展示给学生，在学生掌握了以上基本知识的基础上给定实验内容和目的，让学生自行设计实验方案并完成，得出一定的实验结论。希望通过本实验培养学生主动学习、学以致用、独立思考的能力。二，实验内容选编原则与要求分子生物学实验教学内容选编原则与要求是，根据生物科学和生物技术专业人才的培养目标所需要的基本理论和基本技能的要求，根据本课程的教学性质、条件和教学实践而制定的。既要涵盖分子生物学的基本实验技术，也要体现现代分子生物学发展的新方法、新技术。全书所选实验项目分为两个部分，第一部分为基础性实验，包括感受态细胞的制备与转化、质粒DNA的提取及酶切、琼脂糖凝胶电泳检测DNA、DNA重组、基因组DNA的分离提取、DNA序列测定、PCR基因扩增、真核基因在原核细胞中的表达等内容。要求学生能够掌握基本的实验操作技能。三、教学安排与时数本实验课程在三年级上学期开设，总计54学时。四.考核方法与要求1.平时成绩：包括出勤、实验操作，实验效果、讨论情况等，占30%2．报告成绩：实验报告等，占30%3.考试成绩：占40%4.综合考核成绩：平时成绩+设计成绩+报告成绩+考试成绩实验守则及要求1．穿着要整洁，必须穿实验服
《分子生物学》实验课程简介 适用专业 生物技术、生物科学、生态学 学 时 54 学 分 课程性质 必修 预修课程 生物化学、遗传学、 微生物学、细胞生物学 一． 本课程的性质、地位和作用 分子生物学实验是生物科学和生物技术专业的一门专业基础课程，是一门独立的实验课程， 同时也是为了配合分子生物学的教学而开设的。实验过程中，首先将有关的基本原理、基本 技术和方法给学生做一介绍，然后将分子生物学实验中要用到的仪器以课件的形式展示给学 生，在学生掌握了以上基本知识的基础上给定实验内容和目的，让学生自行设计实验方案并 完成，得出一定的实验结论。希望通过本实验培养学生主动学习、学以致用、独立思考的能 力。 二. 实验内容选编原则与要求 分子生物学实验教学内容选编原则与要求是，根据生物科学和生物技术专业人才的培养目标 所需要的基本理论和基本技能的要求，根据本课程的教学性质、条件和教学实践而制定的。 既要涵盖分子生物学的基本实验技术，也要体现现代分子生物学发展的新方法、新技术。全 书所选实验项目分为两个部分，第一部分为基础性实验, 包括感受态细胞的制备与转化、质 粒 DNA 的提取及酶切、琼脂糖凝胶电泳检测 DNA、DNA 重组、基因组 DNA 的分离提取、 DNA 序列测定、PCR 基因扩增、真核基因在原核细胞中的表达等内容。要求学生能够掌握 基本的实验操作技能。 三. 教学安排与时数 本实验课程在三年级上学期开设，总计 54 学时。 四. 考核方法与要求 1．平时成绩：包括出勤、实验操作，实验效果、讨论情况等，占 30% 2．报告成绩：实验报告等，占 30% 3．考试成绩：占 40% 4．综合考核成绩：平时成绩+设计成绩+报告成绩+考试成绩 实验守则及要求 1. 穿着要整洁，必须穿实验服
2.实验室内禁止吃食物，勿高声谈话及随便走动。3.实验前必须认真预习，熟悉实验的内容，了解所用的仪器用具：实验中应严格按操作规程进行，认真操作、仔细观察，及时记录实验现象及结果：实验结束后，籽细地分析和总结实验结果，认真做好每一次的实验报告。4．实验器具应保持清洁，任何使用过的器具及玻璃器皿必须洗净后放回原处。使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障立即报告，不得擅自拆检。5.实验台面应随时保持整洁、仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应立即盖好放回原处。6.值日生制度：每天安排3-4人值日，其职责是负责实验器具的整理、操作台、水槽、地板等实验室卫生工作和一切服务性工作，并注意实验室的水、电、门、窗等方面情况。注意事项1.实验前应做好试剂的配置、用品灭菌等准备工作。配置基因工程客种试剂，必须要使用重蒸水。2．使用后的器皿必须认真清洗干净，洗完后还要用重蒸水冲洗三次。3.凡是可以进行灭菌的试剂与用具都必须要经过高压蒸汽灭菌后进行使用，防止其他杂质或酶对DNA、RNA或蛋白质的降解。4.凡是基因工程操作所用的一切塑料器具（Eppendorf管、吸嘴等），在使用前都应装入盒子和瓶子中灭菌，且装盒或装瓶过程中都应采用镊子，或戴上一次性手套进行操作，不能直接用手去拿，严防手上杂酶污染。5.．对于Eeppendorf管、吸嘴与非玻璃离心管等只能湿热灭菌，然后放置在50°箱中烘干后使用。6．实验中加入任何试剂后应注意样品的混匀，保温等反应后的样品也应离心摔一下后再进行下步的实验。7.限制性内切酶等工具酶保存于50%的甘油中，-20°可以长期保存。应自始至终将酶保持在零度以下，取酶时不能用手指接触储存酶的部分。在需要加酶的时候将酶从冰箱中取出，放在冰盒里，用完后立即放回冰箱。8.微量移液器的使用：微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器。其装有直接读数容量计，读数由三位拨号数字组成，在移液器容量范围内能连续调节，从上（最大数）到下（最小数）读取。移液器的型号即是其最大容量值。按钮向下压以及放的动作、速度要缓慢平稳。注意事项见实验一
2. 实验室内禁止吃食物，勿高声谈话及随便走动。 3. 实验前必须认真预习，熟悉实验的内容，了解所用的仪器用具：实验中应严格按操作规 程进行，认真操作、仔细观察，及时记录实验现象及结果：实验结束后，籽细地分析和总结 实验结果，认真做好每一次的实验报告。 4. 实验器具应保持清洁，任何使用过的器具及玻璃器皿必须洗净后放回原处。使用贵重精 密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障立即报告，不得擅自拆检。 5. 实验台面应随时保持整洁、仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应立即盖好放回原 处。 6. 值日生制度：每天安排 3-4 人值日，其职责是负责实验器具的整理、操作台、水槽、地 板等实验室卫生工作和一切服务性工作，并注意实验室的水、电、门、窗等方面情况。 注意事项 l. 实验前应做好试剂的配置、用品灭菌等准备工作。配置基因工程各种试剂，必须要使用 重蒸水。 2. 使用后的器皿必须认真清洗干净，洗完后还要用重蒸水冲洗三次。 3. 凡是可以进行灭菌的试剂与用具都必须要经过高压蒸汽灭菌后进行使用，防止其他杂质 或酶对 DNA、RNA 或蛋白质的降解。 4. 凡是基因工程操作所用的一切塑料器具(Eppendorf 管、吸嘴等)，在使用前都应装入盒 子和瓶子中灭菌，且装盒或装瓶过程中都应采用镊子，或戴上一次性手套进行操作，不能直 接用手去拿，严防手上杂酶污染。 5. 对于 Eeppendorf 管、吸嘴与非玻璃离心管等只能湿热灭菌，然后放置在 50°箱中烘干 后使用。 6. 实验中加入任何试剂后应注意样品的混匀，保温等反应后的样品也应离心摔一下后再进 行下步的实验。 7. 限制性内切酶等工具酶保存于 50%的甘油中，-20°可以长期保存。应自始至终将酶保持 在零度以下，取酶时不能用手指接触储存酶的部分。在需要加酶的时候将酶从冰箱中 取出，放在冰盒里，用完后立即放回冰箱。 8. 微量移液器的使用：微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器。其装有直 接读数容量计，读数由三位拨号数字组成，在移液器容量范围内能连续调节，从上(最大数) 到下(最小数)读取。移液器的型号即是其最大容量值。按钮向下压以及放的动作、速度要缓 慢平稳。注意事项见实验一
9.离心机的使用：应注意保持离心管放置位置的对称以及离心管中样品的平衡，并要拧紧盖好其中的离心机内部的盖子，否则会损坏仪器。此外应注意离心管在离心机内的放置方向。10.电子天平使用：1）注意在天平的最大称量范围内使用。2）天平应放在无振动、无空气对流处，使用前须先调节水平泡至中央位置。3）使用后应保持仪器的洁净。11.微波炉内不可使用金属容器以及空载。12.配制药品取试剂时，所用的钥匙不能混用，否则会造成药品污染。13.实验过程中应做好每个样品的标记工作，如样品的名称、保存的时间：且一般在Eeppendorf管上用记号笔作标记时，应在两处重复做好标记
9. 离心机的使用：应注意保持离心管放置位置的对称以及离心管中样品的平衡，并要拧紧 盖好其中的离心机内部的盖子，否则会损坏仪器。此外应注意离心管在离心机内的放置方向。 10. 电子天平使用： 1) 注意在天平的最大称量范围内使用。 2) 天平应放在无振动、无空气对流处，使用前须先调节水平泡至中央位置。 3) 使用后应保持仪器的洁净。 11. 微波炉内不可使用金属容器以及空载。 12. 配制药品取试剂时，所用的钥匙不能混用，否则会造成药品污染。 13. 实验过程中应做好每个样品的标记工作，如样品的名称、保存的时间．且一般在 Eeppendorf 管上用记号笔作标记时，应在两处重复做好标记
实验一：移液器使用一、实验目的在进行分析测试方面的研究时，一般采用移液器（micropipette）量取少量或微量的液体。本次课程学习移液器的正确使用方法及其一些细节操作，以便于后期实验严谨的定量操作。二、实验原理微量的单位定义为微升（microliter，μL）ControlButtonEjectButton1升（liter，L）=1,000毫升(milliliters，mL)，VolumeKnob1毫升（mL））=1,000微升（μ）NumberWind.Tip三、实验材料、仪器和试剂移液器、枪头及离心管四、实验方法及步骤（一）移液器量程认读1.量程：不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围，依取用溶液体积选用适当的微量移液器。量程移液器规格P20.5~2μLP100.5~10μLP202~ 20μLP10011 ~ 100μLP20021~200μLP1000201~1,000μL2.数值窗口的认读
实验一：移液器使用 一 、实验目的 在进行分析测试方面的研究时，一般采用移液器（micropipette）量取少量或微量的液 体。本次课程学习移液器的正确使用方法及其一些细节操作，以便于后期实验严谨的 定量操作。 二 、实验原理 微量的单位定义为微升（microliter，µL） 1 升（liter，L） = 1,000 毫升(milliliters，mL)， 1 毫升（mL） = 1,000 微升（µL） 三 、实验材料、仪器和试剂 移液器、枪头及离心管 四 、实验方法及步骤 （一）移液器量程认读 1. 量程：不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围，依取用溶液体积选用适当的微量移 液器。 移液器规格 量程 P2 0.5 ~ 2µL P10 0.5 ~ 10µL P20 2 ~ 20µL P100 11 ~ 100µL P200 21 ~ 200µL P1000 201 ~ 1,000µL 2. 数值窗口的认读