亲和配基 1.酶的抑制剂 ☆小分子抑制剂有苄脒( benzamidine)、精氨酸 和赖氦酸等。 2.抗体 利用抗体为配基的亲和色谱又称免疫亲和色谱 ( immunoaffinity chromatography)。抗体与 抗原之间的K一般为107~1012Lmol。 冷因此,利用免疫亲和色谱法是高度纯化蛋白质 类生物大分子的有效手段
❖ 亲和配基 1. 酶的抑制剂 ❖ 小分子抑制剂有苄脒（benzamidine）、精氨酸 和赖氨酸等。 2. 抗体 ❖ 利用抗体为配基的亲和色谱又称免疫亲和色谱 （immunoaffinity chromatography）。抗体与 抗原之间的Keq一般为107～1012 L/mol。 ❖ 因此，利用免疫亲和色谱法是高度纯化蛋白质 类生物大分子的有效手段
3.A蛋白 冷 protein A为分子量约42kD的蛋白质,与lgG具 有很强的亲和作用,结合部位为gG分子的FC 片段。A蛋白分子上含有5个FC片段可结合部 冷不同gG的Fc片段的结构非常相似,因此A蛋 白可作为各种抗体的亲和配基,但不同抗体的 结合常数有所不同 々A蛋白与抗体结合并不影响抗体与抗原的结合 能力,因此A蛋白也可用于分离抗原抗体的免 疫复合体
3. A蛋白 ❖ protein A为分子量约42 kD的蛋白质，与IgG具 有很强的亲和作用，结合部位为IgG分子的Fc 片段。A蛋白分子上含有5个Fc片段可结合部 位。 ❖ 不同IgG的Fc片段的结构非常相似，因此A蛋 白可作为各种抗体的亲和配基，但不同抗体的 结合常数有所不同。 ❖ A蛋白与抗体结合并不影响抗体与抗原的结合 能力，因此A蛋白也可用于分离抗原-抗体的免 疫复合体
4.凝集素 冷凝集素( lectin)是与糖特异性结合的蛋白质 (酶和抗体除外)的总称。 ☆伴刀豆球蛋白A( concanavalin A,conA) 可用做糖蛋白、多糖、糖脂等含糖生物大分子 的分析、纯化。pH<56时conA为二聚体 分子量为52kD;pH>5.6时为四聚体,分子 量为102kD,两个亚基( subunit)之间通过 硫键结合。因此,在利用conA为配基的亲 和色谱操作中,操作条件应当适宜
4. 凝集素 ❖ 凝集素（lectin）是与糖特异性结合的蛋白质 （酶和抗体除外）的总称。 ❖ 伴刀豆球蛋白A（concanavalin A，con A） 可用做糖蛋白、多糖、糖脂等含糖生物大分子 的分析、纯化。pH＜5.6时con A为二聚体， 分子量为52 kD；pH＞5.6时为四聚体，分子 量为102 kD，两个亚基（subunit）之间通过 二硫键结合。因此，在利用con A为配基的亲 和色谱操作中，操作条件应当适宜
5.辅酶和磷酸腺苷 脱氢酶和激酶与辅酶之间具有亲和结合作用。 辅酶主要有NAD( nicotinamide adenine dinucleotide)、NADP( NAD phosphate)和 ATP( adenosine triphosphate)等。这些辅酶 可用做脱氢酶和激酶的亲和配基。 ☆AMP( adenosine5- monophosphate)、ADP ( adenosine2,5- diphosphate)的腺苷部分 与上述辅酶的结构类似,可用做这些酶的亲和 配基
5. 辅酶和磷酸腺苷 ❖ 脱氢酶和激酶与辅酶之间具有亲和结合作用。 辅酶主要有 NAD （ nicotinamide adenine dinucleotide）、 NADP（NAD phosphate）和 ATP（adenosine triphosphate）等。这些辅酶 可用做脱氢酶和激酶的亲和配基。 ❖ AMP（adenosine 5'-monophosphate）、 ADP （adenosine 2' ，5'-diphosphate）的腺苷部分 与上述辅酶的结构类似，可用做这些酶的亲和 配基
6.三嗪类色素 利用色素为配基的亲和色谱法又称色素亲和色 谱(Dye- ligand affinity chromatography)。 冷 Triazine dyes是一类分子内含有三嗪环的合成 染料,与NAD的结合部位相同,又称为生体模 拟色素( biomimetic dye)。除脱氢酶和激酶 外,三嗪类色素还与血清白蛋白、 干扰素、核酸酶和糖解酶N-∞o 等具有很高的亲和力。 NH ☆ Cibacron b|ueF3GA: SO5
6. 三嗪类色素 ❖ 利用色素为配基的亲和色谱法又称色素亲和色 谱（Dye-ligand affinity chromatography）。 ❖ Triazine dyes是一类分子内含有三嗪环的合成 染料，与NAD的结合部位相同，又称为生体模 拟色素（biomimetic dye）。除脱氢酶和激酶 外，三嗪类色素还与血清白蛋白、 干扰素、核酸酶和糖解酶 等具有很高的亲和力。 ❖ Cibacron Blue F3GA ：