5.亲和纯化 生物亲和作用 亲和色谱 膜亲和过滤法 亲和双水相萃取 冷亲和反胶团萃取 冷亲和沉淀 冷磁性亲和分离
5. 亲和纯化 ❖ 生物亲和作用 ❖ 亲和色谱 ❖ 膜亲和过滤法 ❖ 亲和双水相萃取 ❖ 亲和反胶团萃取 ❖ 亲和沉淀 ❖ 磁性亲和分离
5.1生物亲和作用 生物亲和作用的本质 冷影响亲和作用的因素 冷亲和作用体系
5.1 生物亲和作用 ❖ 生物亲和作用的本质 ❖ 影响亲和作用的因素 ❖ 亲和作用体系
5.1.1生物亲和作用的本质 ☆生物分子间的这种特异性相互作用称为生物亲 和作用( bioaffinity)或简称亲和作用 (affinity) 々利用生物分子间的这种特异性结合作用的原理 进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化 (affinity purification) 冷亲和作用的分子(物质)对可以是:大分子 小分子,大分子-大分子,大分子-细胞,细胞 细胞
5.1.1 生物亲和作用的本质 ❖ 生物分子间的这种特异性相互作用称为生物亲 和 作 用 （ bioaffinity ） 或 简 称 亲 和 作 用 （affinity）。 ❖ 利用生物分子间的这种特异性结合作用的原理 进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化 （affinity purification）。 ❖ 亲和作用的分子（物质）对可以是：大分子- 小分子，大分子-大分子，大分子-细胞，细胞- 细胞
☆具有亲和作用的分子对之间具有“钥匙”和 “锁孔”的空间结构关系。 冷亲和结合作用,至少存在3个对应官能团相结合 静电作用 ys, Arg, His Gh 冷氢键 er Thr, Gin, Agn eu. Ile 疏水相互作用 Met pro Phe, Tyr, Trp 配位键 冷弱共价键 Me 图5-1蛋白质的结合部位及各种结合作用力
❖ 具有亲和作用的分子对之间具有“钥匙”和 “锁孔” 的空间结构关系。 ❖ 亲和结合作用，至少存在3个对应官能团相结合： ❖ 静电作用 ❖ 氢键 ❖ 疏水相互作用 ❖ 配位键 ❖ 弱共价键 图5-1 蛋白质的结合部位及各种结合作用力
5.1.2影响亲和作用的因素 1.离子强度 φ离子强度影响静电引力、氢键作用、疏水相互 作用等。 2. pH 冷-羧基的pK=34~38 冷β羧基的pK2=39~40 冷-氨基的pK=74~7.5 冷E氦基的pK=100~10.4
5.1.2 影响亲和作用的因素 1. 离子强度 ❖ 离子强度影响静电引力、氢键作用、疏水相互 作用等。 2. pH ❖ -羧基的pKa ＝3.4～3.8 ❖ -羧基的pKa ＝3.9～4.0 ❖ -氨基的pKb ＝7.4～7.5 ❖ -氨基的pKb ＝10.0～10.4