7.过渡金属离子 冷Cu2,N,Zn2和Co2等过渡金属离子可通 过与亚胺二乙酸(IDA)或三羧甲基乙二胺 (TED)形成螯合金属盐固定在固定相粒子表 面,用做亲和吸附蛋白质的配基 这种利用金属离子为配基的亲和色谱一般称为 金属螯合色谱( metal chelate chromatography)或固定化金属离子亲和色谱 (immobilized metal affinity chromatography, MAC)
7. 过渡金属离子 ❖ Cu2+ ，Ni2+ ，Zn2+和Co2+等过渡金属离子可通 过与亚胺二乙酸（IDA）或三羧甲基乙二胺 （TED）形成螯合金属盐固定在固定相粒子表 面，用做亲和吸附蛋白质的配基。 ❖ 这种利用金属离子为配基的亲和色谱一般称为 金属螯合色谱（metal chelate chromatography）或固定化金属离子亲和色谱 （immobilized metal affinity chromatography， IMAC）
8.组氨酸 组氨酸可与蛋白质发生亲和结合作用:静电和 疏水性相互作用均有可能参与亲和结合。 冷在盐浓度较低和pH约等于目标蛋白质p的溶液 中,固定化组氨酸的亲和吸附作用最强,随着 盐浓度增大,亲和吸附作用降低 CH2-NH OoC--CH-CH2-C=CH NH+ NH CH 固定化组氨酸
8. 组氨酸 ❖ 组氨酸可与蛋白质发生亲和结合作用：静电和 疏水性相互作用均有可能参与亲和结合。 ❖ 在盐浓度较低和pH约等于目标蛋白质pI的溶液 中，固定化组氨酸的亲和吸附作用最强，随着 盐浓度增大，亲和吸附作用降低
5.肝素 冷肝素( heparin)是存在于哺乳动物的肝、肺、 肠等脏器中的酸性多糖类物质,分子量一般为5 至30kD,具有抗凝血作用 肝素与脂蛋白、脂肪酶、甾体受体、限制性核 酸内切酶、抗凝血酶、凝血蛋白质等具有亲和 作用,可用作这些物质的亲和配基。 冷肝素的亲和结合作用在中性pH和低浓度盐溶液 中较强,随着盐浓度的增大结合作用降低
5. 肝素 ❖ 肝素（heparin）是存在于哺乳动物的肝、肺、 肠等脏器中的酸性多糖类物质，分子量一般为5 至30 kD，具有抗凝血作用。 ❖ 肝素与脂蛋白、脂肪酶、甾体受体、限制性核 酸内切酶、抗凝血酶、凝血蛋白质等具有亲和 作用，可用作这些物质的亲和配基。 ❖ 肝素的亲和结合作用在中性pH和低浓度盐溶液 中较强，随着盐浓度的增大结合作用降低
亲和色谱填料载体 φ亲和色谱的理想载体应具有下列特性: ①不溶性; ②渗透性; ③高硬度及适当的颗粒形式; ④最低的吸附力; ⑤较好的化学稳定性; ⑥抗微生物和酶的侵蚀; ⑦亲水性; ⑧具有大量的供反应的化学基团
❖ 亲和色谱填料载体 ❖ 亲和色谱的理想载体应具有下列特性： ①不溶性； ②渗透性； ③高硬度及适当的颗粒形式； ④最低的吸附力； ⑤较好的化学稳定性； ⑥抗微生物和酶的侵蚀； ⑦亲水性； ⑧具有大量的供反应的化学基团
☆常规的亲和色谱填料都是以软质凝胶,诸如葡 聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等作为载体材料的 ☆近年来,为了满足快速高效分离的需要,以多 孔硅胶和合成高分子化合物为载体的高效AFC 色谱填料,得以迅速发展 ☆亲和色谱填料的制备过程一般包括:载体 ( carrier、 support)的选择、载体的活化和配 基的连接
❖ 常规的亲和色谱填料都是以软质凝胶，诸如葡 聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等作为载体材料的。 ❖ 近年来，为了满足快速高效分离的需要，以多 孔硅胶和合成高分子化合物为载体的高效AFC 色谱填料，得以迅速发展。 ❖ 亲和色谱填料的制备过程一般包括：载体 （carrier、support）的选择、载体的活化和配 基的连接