3.抑制氢键形成的物质 冷脲和盐酸胍( guanidinohydrochloric acid) 的存在可抑制氢键的形成。 4.温度 ☆温度升高,静电作用、氢键及金属配位键减 弱;疏水性相互作用增强 5.离液离子 冷在SCN,|和CO4-等离液阴离子存在下, 疏水相互作用降低。 6.螯合剂
3. 抑制氢键形成的物质 ❖ 脲和盐酸胍（guanidinohydrochloric acid） 的存在可抑制氢键的形成。 4. 温度 ❖ 温度升高，静电作用、氢键及金属配位键减 弱；疏水性相互作用增强 。 5. 离液离子 ❖ 在SCN－，I－和ClO4 －等离液阴离子存在下， 疏水相互作用降低。 6. 螯合剂
51.3亲和作用体系 冷将亲和体系中的一种分子与固体粒子共价偶联, 可特异性结合另一种分子(目标产物),使其 从混合物中高选择性地分离纯化。 冷一般将被固定的分子称为其亲和结合对象的配 基( ligand),用L表示。 E+LE·I Ka=ELL K=E E][L] 冷K越大,亲和结合作用越强。K。一般为104 103L/mo,最高可达到1015Lmol
5.1.3 亲和作用体系 ❖ 将亲和体系中的一种分子与固体粒子共价偶联， 可特异性结合另一种分子（目标产物） ，使其 从混合物中高选择性地分离纯化。 ❖ 一般将被固定的分子称为其亲和结合对象的配 基（ligand），用L表示。 ❖ Keq越大，亲和结合作用越强。Keq一般为104～ 108 L/mol，最高可达到1015 L/mol
表5-1常用的亲和作用体系 特异性 亲和作用体系 高特异性 抗原--单克隆抗体 荷尔蒙--受体蛋白 核酸-互补碱基链段、核酸结合蛋白 酶-底物、产物、抑制剂 群特异性免疫球蛋白--A蛋白、G蛋白 酶-:辅酶 凝集素--糖、糖蛋白、细胞、细胞表面受体 酶、蛋白质--肝素 酶、蛋白质-活性色素(染料) 酶、蛋白质-过度金属离子 酶、蛋白质-氨基酸(组氨酸等)
表5-1 常用的亲和作用体系 特异性 亲和作用体系 高特异性 抗原----单克隆抗体 荷尔蒙----受体蛋白 核酸----互补碱基链段、核酸结合蛋白 酶----底物、产物、抑制剂 群特异性 免疫球蛋白----A蛋白、G蛋白 酶----辅酶 凝集素----糖、糖蛋白、细胞、细胞表面受体 酶、蛋白质----肝素 酶、蛋白质----活性色素（染料） 酶、蛋白质----过度金属离子 酶、蛋白质----氨基酸（组氨酸等）
52亲和色谱 亲和色谱的特点 ①选择性高、特异性极强 ②操作条件温和 ③回收率高 亲和色谱的局限性 ①普遍性、通用性不够 ②费用高
5.2 亲和色谱 ❖ 亲和色谱的特点 ①选择性高、特异性极强 ②操作条件温和 ③回收率高 ❖ 亲和色谱的局限性 ①普遍性、通用性不够 ②费用高
52.1亲和色谱填料 ☆亲和吸附作用是在特定配基的存在下实现的, 需根据目标产物选择适当的亲和配基修饰固定 相粒子,制备所需的亲和吸附介质。 冷少数特殊情况如 Sephadex凝胶可亲和吸附伴 刀豆球蛋白A(一种植物凝集素) 冷在利用亲和色谱技术纯化目标产物时,商品化 的亲和吸附介质往往不能满足特殊目标产物的 需要,有必要自制亲和吸附介质
5.2.1 亲和色谱填料 ❖ 亲和吸附作用是在特定配基的存在下实现的， 需根据目标产物选择适当的亲和配基修饰固定 相粒子，制备所需的亲和吸附介质。 ❖ 少数特殊情况如Sephadex凝胶可亲和吸附伴 刀豆球蛋白A（一种植物凝集素）。 ❖ 在利用亲和色谱技术纯化目标产物时，商品化 的亲和吸附介质往往不能满足特殊目标产物的 需要，有必要自制亲和吸附介质