天然生物成分分离实验指导 实验须知 天然生物成分分离实验教学是天然生物成分分离技术课程的重要组成部分，是使学生 进一步理论联系实际，掌握天然产物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生 分析和解决问题能力。养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。为此，提出 下列实验须知： 1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、 漏水等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。 2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划， 争取准时结束。实验过程应养成及时记录的习惯。凡是观察到的现象和结果及有关的重量、 体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所 得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师。 3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应 保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸 内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。 4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。节 约用水、用电、药用试剂。严格药品用量。 5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实 验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。 实验一 薄层板的制备、活度测定及应用 一、目的要求 1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法 2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法 3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分 二、薄层板的制备 1．不加粘合剂的薄层涂布法 （1）氧化铝薄层 将吸附剂置于薄层涂布器中，调节涂布器的高度，向前推动，即得均匀薄层。本实验 主要用下述简易操作涂布薄层，取表面光滑，直径统一的玻璃一支，依据所制备薄层的宽度
天然生物成分分离实验指导 实验须知 天然生物成分分离实验教学是天然生物成分分离技术课程的重要组成部分，是使学生 进一步理论联系实际，掌握天然产物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生 分析和解决问题能力。养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。为此，提出 下列实验须知： 1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、 漏水等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。 2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划， 争取准时结束。实验过程应养成及时记录的习惯。凡是观察到的现象和结果及有关的重量、 体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所 得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师。 3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应 保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸 内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。 4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。节 约用水、用电、药用试剂。严格药品用量。 5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实 验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。 实验一 薄层板的制备、活度测定及应用 一、目的要求 1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法 2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法 3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分 二、薄层板的制备 1．不加粘合剂的薄层涂布法 （1）氧化铝薄层 将吸附剂置于薄层涂布器中，调节涂布器的高度，向前推动，即得均匀薄层。本实验 主要用下述简易操作涂布薄层，取表面光滑，直径统一的玻璃一支，依据所制备薄层的宽度
厚度要求，在玻璃棒两端套上厚度为 0.3~1mm 的塑料圈或金属环，并在玻璃棒一端一定距 离处套上较厚的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将氧化 铝粉均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动。 （2）纤维素薄层 一般取纤维素粉 1 份加水约 5 份，在烧杯中混合均匀后，倒在玻璃板上，轻轻振动， 使涂布均匀，水平放置，待水分蒸发至近干，于 100±2℃干燥 30~60 分钟即得。 （3）聚酰胺薄层 取锦纶丝（无色干净废丝即可）用乙醇加热浸泡 2~3 次，除去腊质等。称取洗净的锦 纶丝 1 克，加 85%甲酸 ml，在水浴上加热使溶，再加 70%乙醇 6ml。继续加热使完全溶解 成透明胶状溶液。将此溶液适量倒在水平放置的，用清洁液洗净的玻璃片上，并自然向周围 推匀，厚度约 0.3mm，薄层太厚时，干后会裂开。将铺好的薄层水平放在盛温水的盘上， 使盘中的水蒸汽能熏湿薄层，盘子加玻璃板盖严密，薄板放置约 1 小时完全固化变不透明白 色，再放数小时后，泡在流水中洗去甲酸，先在空气中晾干，后在烘箱中 0℃恒温加热活化 15 分钟，冷后置干燥器中贮存备用。 2．加粘合剂薄层的涂布法 （1）硅胶 G 薄层 取硅胶 G 或硅胶 GF 一份，置烧杯中加水约 5 份混合均匀，放置 片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布）， 均匀涂布成 0.25~0.5mm 厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，在水平位置放置，待 薄层发白近干，于烘箱中 100℃活化 0.5~1 小时，冷后贮于干燥器内备用。活化温度和时间 可依需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干 燥，不经活化即可贮存备用。 （2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层 取羧甲基纤维素 0.2g，溶于 25ml 水中，在水浴上加热搅拌使完全溶解，倒入烧杯中，加薄层层析用硅胶（颗粒度 10~40μm 的约 6~8g）。激光照排系统混成均匀的稀糊，按照硅胶 G 薄层涂布法制备薄层，或取 0.8% 羧甲基纤维纳 10ml，倒入广口瓶（高约 10~12cm）中，然后逐步加入薄层层析用硅胶 3.3 克，不断振摇成均匀的稀糊，把两块载玻片面对面结合在一起，这样每片只有一面与硅胶糊 接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄片，将未粘附硅胶糊的那一面水 平放在一张清洁的纸上，让其自然阴干，100℃下烘 30 分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗 的硅胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。 氧化铝薄层，氧化铝羧甲基纤维钠薄层的制备方法同上，一般所需要氧化铝比硅胶稍 多。 目前国内外市场有预先制好的薄层板，底板用玻璃、塑料、铝片等。可按需要用玻璃 刀划割，也有用剪刀剪成所要的大小，使用方便，价格贵些。 3．特殊薄层的制备
厚度要求，在玻璃棒两端套上厚度为 0.3~1mm 的塑料圈或金属环，并在玻璃棒一端一定距 离处套上较厚的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将氧化 铝粉均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动。 （2）纤维素薄层 一般取纤维素粉 1 份加水约 5 份，在烧杯中混合均匀后，倒在玻璃板上，轻轻振动， 使涂布均匀，水平放置，待水分蒸发至近干，于 100±2℃干燥 30~60 分钟即得。 （3）聚酰胺薄层 取锦纶丝（无色干净废丝即可）用乙醇加热浸泡 2~3 次，除去腊质等。称取洗净的锦 纶丝 1 克，加 85%甲酸 ml，在水浴上加热使溶，再加 70%乙醇 6ml。继续加热使完全溶解 成透明胶状溶液。将此溶液适量倒在水平放置的，用清洁液洗净的玻璃片上，并自然向周围 推匀，厚度约 0.3mm，薄层太厚时，干后会裂开。将铺好的薄层水平放在盛温水的盘上， 使盘中的水蒸汽能熏湿薄层，盘子加玻璃板盖严密，薄板放置约 1 小时完全固化变不透明白 色，再放数小时后，泡在流水中洗去甲酸，先在空气中晾干，后在烘箱中 0℃恒温加热活化 15 分钟，冷后置干燥器中贮存备用。 2．加粘合剂薄层的涂布法 （1）硅胶 G 薄层 取硅胶 G 或硅胶 GF 一份，置烧杯中加水约 5 份混合均匀，放置 片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布）， 均匀涂布成 0.25~0.5mm 厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，在水平位置放置，待 薄层发白近干，于烘箱中 100℃活化 0.5~1 小时，冷后贮于干燥器内备用。活化温度和时间 可依需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干 燥，不经活化即可贮存备用。 （2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层 取羧甲基纤维素 0.2g，溶于 25ml 水中，在水浴上加热搅拌使完全溶解，倒入烧杯中，加薄层层析用硅胶（颗粒度 10~40μm 的约 6~8g）。激光照排系统混成均匀的稀糊，按照硅胶 G 薄层涂布法制备薄层，或取 0.8% 羧甲基纤维纳 10ml，倒入广口瓶（高约 10~12cm）中，然后逐步加入薄层层析用硅胶 3.3 克，不断振摇成均匀的稀糊，把两块载玻片面对面结合在一起，这样每片只有一面与硅胶糊 接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄片，将未粘附硅胶糊的那一面水 平放在一张清洁的纸上，让其自然阴干，100℃下烘 30 分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗 的硅胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。 氧化铝薄层，氧化铝羧甲基纤维钠薄层的制备方法同上，一般所需要氧化铝比硅胶稍 多。 目前国内外市场有预先制好的薄层板，底板用玻璃、塑料、铝片等。可按需要用玻璃 刀划割，也有用剪刀剪成所要的大小，使用方便，价格贵些。 3．特殊薄层的制备
根据分离工作的特殊需要，可制成以下几种特制薄层。 （1）酸、碱薄层和 pH 缓冲薄层 为了改变吸附剂的酸碱性，以改进分离效果，可在吸附剂中加入稀酸溶液（如 0.1~0.5N 草酸溶液）代替水制成酸性氧化铅薄层使用，硅胶微呈酸性，可在铺层时用稀碱溶液（如 0.1~0.5N 氢氧化钠溶液）代替水制成碱性的硅胶薄层。当用醋酸钠、磷酸盐等不同 pH 的缓 冲液代替水铺层，制成一定 pH 缓冲的薄层。 羧甲基纤维素钠的溶液一般用 0.5~1%浓度，宜预先配制后静置，取其上层澄清溶液应 用，则所制备的薄层表面较为细腻平滑。常用 0.8%浓度。CMC-Na 系中粘度。300~500 厘 泊（粘度单位）。CMC-Na 系碳水化合物，调制时应在水浴上进行。活化温度不应过高，防 止碳化。 （2）络合薄层 硝酸银薄层的制法，可在吸附剂中加入 5~25%硝酸银水溶液代替水制成均匀糊状，再 按常法铺成薄层，制成薄层避光阴干，于 105℃活化半小时后避光贮存，制成的薄层以不变 成灰色为好，在三天内应用。也可先把硝酸银用少量水溶解，再用甲醇稀释成 10%溶液， 把预先制好的硅胶 G 薄层浸入此溶液中约 1 分钟，取出避光阴干，按上法活化，贮存。 三、吸附剂的活度测定 1．氧化铝活度的测定 一般可用 4~5 种偶氮染料以薄层层析法进行测定。 染料试剂的配制：取偶氮苯（Azobenzene）50mg，对甲氧基偶氮苯（P-Methoxyuzobenzene）, 苏丹黄（Sudan I, Benzeneazo-β-naphthol），苏丹红（Sudan Ⅲ Tetrazobenzol-β-naphthol），对 氨基偶氮苯（P-Aminoazobenzene）各 20mg，分别溶于 50ml 重蒸馏的四氯化碳（经氢氧化 钠干燥）中。 常法制备不含粘合剂氧化铝薄层，以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端 2~3 cm 处间隔 1cm 左右轻轻点上 5 个可以看清的小点，各吸取约 0.02ml 染料试剂分别点滴于原点上，以 四氯化碳为展开剂，展开时薄层板与容器底部交角为 10~40°之间，展开后测出各斑点的 Rf 值，从表 1 确定氧化铝的活度（一般高活性氧化铝Ⅰ~Ⅲ级活度使用本法时，结果往往偏低）。 另取不含粘合剂氧化铝薄层板一块，置于水蒸汽饱和容器内，2~3 小时后取出，按上述 方法测定活度。观察有无变化。 表 1 氧化铝活度与偶氮染料外值关系 偶氮染料 氧化铝活度级 Rf 值 二级 三级 四级 五级 偶氮苯 0.59 0.72 0.85 0.95 对甲氧基偶氮 苯 0.16 0.45 0.69 0.89
根据分离工作的特殊需要，可制成以下几种特制薄层。 （1）酸、碱薄层和 pH 缓冲薄层 为了改变吸附剂的酸碱性，以改进分离效果，可在吸附剂中加入稀酸溶液（如 0.1~0.5N 草酸溶液）代替水制成酸性氧化铅薄层使用，硅胶微呈酸性，可在铺层时用稀碱溶液（如 0.1~0.5N 氢氧化钠溶液）代替水制成碱性的硅胶薄层。当用醋酸钠、磷酸盐等不同 pH 的缓 冲液代替水铺层，制成一定 pH 缓冲的薄层。 羧甲基纤维素钠的溶液一般用 0.5~1%浓度，宜预先配制后静置，取其上层澄清溶液应 用，则所制备的薄层表面较为细腻平滑。常用 0.8%浓度。CMC-Na 系中粘度。300~500 厘 泊（粘度单位）。CMC-Na 系碳水化合物，调制时应在水浴上进行。活化温度不应过高，防 止碳化。 （2）络合薄层 硝酸银薄层的制法，可在吸附剂中加入 5~25%硝酸银水溶液代替水制成均匀糊状，再 按常法铺成薄层，制成薄层避光阴干，于 105℃活化半小时后避光贮存，制成的薄层以不变 成灰色为好，在三天内应用。也可先把硝酸银用少量水溶解，再用甲醇稀释成 10%溶液， 把预先制好的硅胶 G 薄层浸入此溶液中约 1 分钟，取出避光阴干，按上法活化，贮存。 三、吸附剂的活度测定 1．氧化铝活度的测定 一般可用 4~5 种偶氮染料以薄层层析法进行测定。 染料试剂的配制：取偶氮苯（Azobenzene）50mg，对甲氧基偶氮苯（P-Methoxyuzobenzene）, 苏丹黄（Sudan I, Benzeneazo-β-naphthol），苏丹红（Sudan Ⅲ Tetrazobenzol-β-naphthol），对 氨基偶氮苯（P-Aminoazobenzene）各 20mg，分别溶于 50ml 重蒸馏的四氯化碳（经氢氧化 钠干燥）中。 常法制备不含粘合剂氧化铝薄层，以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端 2~3 cm 处间隔 1cm 左右轻轻点上 5 个可以看清的小点，各吸取约 0.02ml 染料试剂分别点滴于原点上，以 四氯化碳为展开剂，展开时薄层板与容器底部交角为 10~40°之间，展开后测出各斑点的 Rf 值，从表 1 确定氧化铝的活度（一般高活性氧化铝Ⅰ~Ⅲ级活度使用本法时，结果往往偏低）。 另取不含粘合剂氧化铝薄层板一块，置于水蒸汽饱和容器内，2~3 小时后取出，按上述 方法测定活度。观察有无变化。 表 1 氧化铝活度与偶氮染料外值关系 偶氮染料 氧化铝活度级 Rf 值 二级 三级 四级 五级 偶氮苯 0.59 0.72 0.85 0.95 对甲氧基偶氮 苯 0.16 0.45 0.69 0.89
苏丹黄 0.02 0.25 0.87 0.98 苏丹红 0.00 0.10 0.35 0.50 对氨基偶氮苯 0.00 0.05 0.08 0.19 2．硅胶活度的测定 一般选用三种染料的薄层层析法进行测定。 欧洲药典 1969 年记载用 0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene）。 苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline）的 苯溶液各 10μl 点滴于硅胶 G 或硅胶 H 薄层上，以苯为展开剂，展开 10cm（约 20 分钟）， 三种染料应明显分离，靛酚蓝斑点接近于起始线。二甲基黄斑点在薄层的当中。苏丹红斑点 与二甲基黄斑点之间，则认为薄层板活性符合要求。 国内青岛海洋化工厂出售薄层层析用的硅胶在吸附剂名称之后加几个字标明的意思是： 硅胶 G（G 是 Gypsum 石膏的缩写。表示加了石膏），硅胶 H（H 表示不加石膏），硅胶 GF254 （F254 表示加石膏和波长 254 显绿色荧光的硅酸锌锰）。硅胶 GF365（表示加石膏和波长 365nm 显黄色荧光的硫化锌镉）。氧化铝则类推。 四、薄层层析的应用 薄层层析法在天然产物化学成分的研究中，主要应用于化学成分的预试、化学成分的鉴 定及探索柱层分离的条件。用薄层层析进行中草药化学成分检识，可依据各类成分性质及熟 知的条件有针对性地进行。由于在薄层上展开后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试 结果更为可靠，不仅可通过显色获知成分类型，而且可初步了解主要成分的数目及其极性大 小。 例一：湖北贝母生物碱成分的 TLC 检识 吸附剂：硅胶 CMC- Na 薄层 样品：湖北贝母总生物碱氯仿溶液 展开剂：C6H5-EtoAc-NHEt2（6：4：1） 显色剂：改良碘化铋钾喷雾 例二：丹参色素的 TLC 检识 吸附剂：硅胶 G-CMc-Na 板 样品：丹参乙醚提取液 展开剂：石油醚-醋酸乙酯（9：1） 记录 TLC 结果
苏丹黄 0.02 0.25 0.87 0.98 苏丹红 0.00 0.10 0.35 0.50 对氨基偶氮苯 0.00 0.05 0.08 0.19 2．硅胶活度的测定 一般选用三种染料的薄层层析法进行测定。 欧洲药典 1969 年记载用 0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene）。 苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline）的 苯溶液各 10μl 点滴于硅胶 G 或硅胶 H 薄层上，以苯为展开剂，展开 10cm（约 20 分钟）， 三种染料应明显分离，靛酚蓝斑点接近于起始线。二甲基黄斑点在薄层的当中。苏丹红斑点 与二甲基黄斑点之间，则认为薄层板活性符合要求。 国内青岛海洋化工厂出售薄层层析用的硅胶在吸附剂名称之后加几个字标明的意思是： 硅胶 G（G 是 Gypsum 石膏的缩写。表示加了石膏），硅胶 H（H 表示不加石膏），硅胶 GF254 （F254 表示加石膏和波长 254 显绿色荧光的硅酸锌锰）。硅胶 GF365（表示加石膏和波长 365nm 显黄色荧光的硫化锌镉）。氧化铝则类推。 四、薄层层析的应用 薄层层析法在天然产物化学成分的研究中，主要应用于化学成分的预试、化学成分的鉴 定及探索柱层分离的条件。用薄层层析进行中草药化学成分检识，可依据各类成分性质及熟 知的条件有针对性地进行。由于在薄层上展开后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试 结果更为可靠，不仅可通过显色获知成分类型，而且可初步了解主要成分的数目及其极性大 小。 例一：湖北贝母生物碱成分的 TLC 检识 吸附剂：硅胶 CMC- Na 薄层 样品：湖北贝母总生物碱氯仿溶液 展开剂：C6H5-EtoAc-NHEt2（6：4：1） 显色剂：改良碘化铋钾喷雾 例二：丹参色素的 TLC 检识 吸附剂：硅胶 G-CMc-Na 板 样品：丹参乙醚提取液 展开剂：石油醚-醋酸乙酯（9：1） 记录 TLC 结果
实验二 粉防己生物碱的提取分离与鉴定 汉防己为防己科千金藤属物 Stephania tetrandra S. Mcore 的根，是祛风解热镇痛药物， 其有效成分为生物碱。主要是汉防己甲素和汉防已乙素。临床上除用作治疗高血压、神经性 疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用， 此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。 一、目的要求 通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。 1． 生物碱的一般提取方法。 2． 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定 二、已知生物碱的结构和性质 汉防已根中总生物碱含量为 1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含 量约 1%，汉防已乙素，含量约 0.5%；轮环藤酚碱，含量为 0.2%； 以及其它数种微量生物碱。 1．汉防已甲素（Tetrandrine， 汉防已碱，粉防已碱） 无色针晶，不溶于水和石油 醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、 乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者， 150℃左右熔后加热又固化，至 213℃复熔。 2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱） 溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的 溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。籍此可以相互分离，用不同溶剂重结 昌时，其晶形和溶点不同： 乙醇 细棒状结晶 mp 245~40℃ 甲醇 细棒状结晶 mp177~9℃ 丙酮 六面粒状晶 mp134℃ 吡啶-甲醇 mp 121~2℃ 环已烷-EtocAc mp 156℃ 3．轮环藤酚碱（Cylanoline） 为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无 色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结 N OH OCH3 CH3O HO OH CH3 N OCH3 OR OCH3 O CH3O N CH3 CH3 H H R=CH3 R=H 汉防己甲素 汉防己乙素 O
实验二 粉防己生物碱的提取分离与鉴定 汉防己为防己科千金藤属物 Stephania tetrandra S. Mcore 的根，是祛风解热镇痛药物， 其有效成分为生物碱。主要是汉防己甲素和汉防已乙素。临床上除用作治疗高血压、神经性 疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用， 此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。 一、目的要求 通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。 1． 生物碱的一般提取方法。 2． 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定 二、已知生物碱的结构和性质 汉防已根中总生物碱含量为 1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含 量约 1%，汉防已乙素，含量约 0.5%；轮环藤酚碱，含量为 0.2%； 以及其它数种微量生物碱。 1．汉防已甲素（Tetrandrine， 汉防已碱，粉防已碱） 无色针晶，不溶于水和石油 醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、 乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者， 150℃左右熔后加热又固化，至 213℃复熔。 2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱） 溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的 溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。籍此可以相互分离，用不同溶剂重结 昌时，其晶形和溶点不同： 乙醇 细棒状结晶 mp 245~40℃ 甲醇 细棒状结晶 mp177~9℃ 丙酮 六面粒状晶 mp134℃ 吡啶-甲醇 mp 121~2℃ 环已烷-EtocAc mp 156℃ 3．轮环藤酚碱（Cylanoline） 为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无 色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结 N OH OCH3 CH3O HO OH CH3 N OCH3 OR OCH3 O CH3O N CH3 CH3 H H R=CH3 R=H 汉防己甲素 汉防己乙素 O