第二节：蛋白质的大规模分离鉴定技术 0二、同位素亲和标签技术 (一)二维色谱-质谱技术(2D-HPLC/MS) 同位素亲和标签(isotope coded affinity tag,ICAT): 技术 ICAT方法的关键是ICAT试剂的应用。该试剂由3部分组成。中间部分 被称为连接部分，分别连接8个氢原子或重氢原子，前者称为轻链试剂 后者称为重链试剂。中间部分一头连接一个巯基的特异反应基团，可 与蛋白质中半胱氨酸上的巯基连接，从而实现对蛋白质的标记，另一 头连接生物素，用于标记蛋白质或多肽链的亲和纯化。 ICAT 试剂 重经：8A(X) 轻链：0-(A1(X) 生物系 连接了重或轻 蔬基特并反应基团 专一与Cys共价结合 2
二、同位素亲和标签技术 第二节：蛋白质的大规模分离鉴定技术 1 2 （一）二维色谱- 质谱技术（2D-HPLC/MS） 同位素亲和标签（isotope coded affinity tag，ICAT）技术 ICAT 方法的关键是ICAT 试剂的应用。该试剂由3 部分组成。中间部分 被称为连接部分，分别连接8 个氢原子或重氢原子，前者称为轻链试剂， 后者称为重链试剂。中间部分一头连接一个巯基的特异反应基团，可 与蛋白质中半胱氨酸上的巯基连接，从而实现对蛋白质的标记，另一 头连接生物素，用于标记蛋白质或多肽链的亲和纯化
第二节：蛋白质的大规模分离鉴定技术 0三、同位素亲和标签技术 (一)二维色谱-质谱技术(2D-HPLC/MS) 同位素亲和标签(isotope coded affinity tag,ICAT) 技术 ICAT的优点在于其可以对混合样品（来自正常和病变细胞或组织等） 直接测试；能够快速定性和定量鉴定低丰度蛋白质，尤其是膜蛋白等 疏水性蛋白质等；还可以快速找出重要功能蛋白质（疾病相关蛋白质 及生物标志分子) T陶 细胞状态I 亲和 550560570580 了 程胎能 丰纪氨碗国 LCM5对的定量 的案和纯化 细胞状态Ⅱ 半胱数 酸标记 MSMS蛋白质识别 1 3
三、同位素亲和标签技术 第二节：蛋白质的大规模分离鉴定技术 1 3 （一）二维色谱- 质谱技术（2D-HPLC/MS） 同位素亲和标签（isotope coded affinity tag，ICAT）技术 ICAT 的优点在于其可以对混合样品（来自正常和病变细胞或组织等） 直接测试；能够快速定性和定量鉴定低丰度蛋白质，尤其是膜蛋白等 疏水性蛋白质等；还可以快速找出重要功能蛋白质（疾病相关蛋白质 及生物标志分子）
第二节：蛋白质的大规模分离鉴定技术 00M0以 四、表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术 表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption/,ionization-time of flight--mass spectra,SELDI-TOF-MS)简称飞行 质谱技术。将样品经过简单的预处理后直接滴加到表面经过特殊修饰的芯片上 利用激光脉冲辐射使芯池中的分析物解吸形成荷电离子，根据不同质荷比，这 些离子在仪器场中飞行的时间长短不一，由此绘制出一张质谱图来。该图经计 算机软件处理还可形成模拟谱图，同时直接显示样品中各种蛋白质的分子质量、 含量等信息。 4
四、表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术 第二节：蛋白质的大规模分离鉴定技术 1 4 表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术（surface-enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectra，SELDI-TOF-MS）简称飞行 质谱技术。将样品经过简单的预处理后直接滴加到表面经过特殊修饰的芯片上， 利用激光脉冲辐射使芯池中的分析物解吸形成荷电离子，根据不同质荷比，这 些离子在仪器场中飞行的时间长短不一，由此绘制出一张质谱图来。该图经计 算机软件处理还可形成模拟谱图，同时直接显示样品中各种蛋白质的分子质量、 含量等信息