四寡核苷酸探针 寡核苷酸探针是由实验者设计、经核苷酸合成仪人工 合成的。 l探针制备方便,可以根据需要设计合成各种寡核苷 酸片段,从基因组DNA文库或cDNA文库中筛选特定 的克隆 2非常适用于检测已知序列基因中的点突变或定点诱 变技术产生的点突变。 3用新的酶促方法标记可以得到高比活度标记探针
㈣ 寡核苷酸探针 寡核苷酸探针是由实验者设计、经核苷酸合成仪人工 合成的。 1.探针制备方便，可以根据需要设计合成各种寡核苷 酸片段，从基因组DNA文库或cDNA文库中筛选特定 的克隆。 2.非常适用于检测已知序列基因中的点突变或定点诱 变技术产生的点突变。 3.用新的酶促方法标记可以得到高比活度标记探针
标记物头 标记物与探针的结合不影响杂交的特异性和稳定性 ()放射性同位素 放射性同位素探针标记物,有高度特异性,缺点是易 造成放射性污染,半衰期较短,不能长期存放。常用 的有32P、3H35s,有时也用C、125或131I 非放射性标记物 1).半抗原 (2)配体 (3)荧光素 4)。化学发光技术
二、标记物 标记物与探针的结合不影响杂交的特异性和稳定性。 ㈠ 放射性同位素 放射性同位素探针标记物，有高度特异性，缺点是易 造成放射性污染，半衰期较短，不能长期存放。常用 的有32P、 3H、 35S，有时也用14C、 125I或131I。 ㈡ 非放射性标记物 (1) 半抗原 (2) 配体 (3) 荧光素 (4) 化学发光技术
三、探针放射性同位素标记法 ()放射性同位素的选择 3P、3s或强均可用于标记DNA或RNA。32P最常用 于核酸的标记。3适用于原位杂交和DNA序列测定。 3H放射比活度低,故常用于原位杂交
三、探针放射性同位素标记法 ㈠ 放射性同位素的选择 32P、 35S或3H均可用于标记DNA或RNA。 32P最常用 于核酸的标记。 35S适用于原位杂交和DNA序列测定。 3H放射比活度低，故常用于原位杂交
)核酸探针的标记方法 1缺口平移法(图7-1) 大肠杆菌DNA聚合酶琪有53DNA聚合酶活性 以相对应的链为模板,从切口处30H端逐个加入新 的核苷酸,此酶还具有5→3外切核酸酶活性,可从 切口的5端逐个切去核苷酸,造成切口平移。若反应 体系中存在一种或多种标记的核苷酸,如-32P dNTP,则随着反应的进行,这些标记的核苷酸将置 换原有的核苷酸,制备出核素标记的DNA探针。缺口 平移法适用于标记大于1kb的双链DNA
㈡ 核酸探针的标记方法 ⒈缺口平移法(图7-1) 大肠杆菌DNA聚合酶I具有5′→3′DNA聚合酶活性， 以相对应的链为模板，从切口处3′-OH端逐个加入新 的核苷酸，此酶还具有5′→3′外切核酸酶活性，可从 切口的5′端逐个切去核苷酸，造成切口平移。若反应 体系中存在一种或多种标记的核苷酸，如[- 32P] dNTP，则随着反应的进行，这些标记的核苷酸将置 换原有的核苷酸，制备出核素标记的DNA探针。缺口 平移法适用于标记大于1 kb的双链DNA