Probe 1 Probe 2 B Hep pabAB PKS c.105 kb 000 z145 5如 pHZ138 pHZ151 pHZ119 PHZ197 Z2220022222 PHZ139,PHZ140 winn AA ws pHZA,PHZI43 3 n DATAA pHZ218,pHZ219 aaaaadaampHz22o pHZ221 50 60 70 80 90 100 110 120130 140150160k 13
13 Probe 1 Probe 2 B A
南 二、工作原理及步骤 1、原理： 1)在入噬菌体的正常生命周期中，会产生由数百个DNA拷 贝组成的多联体分子。前后两个DNA基因组之间都是通过 cos位点连接起来的。 2)噬菌体具有的一种位点特异的切割体系(site-specific cutting system),又叫Ter体系，能识别两个相距适宜的cos位 点3845kb,将多连体分子切割成单位长度的片段，并将 它们包装到噬菌体头部中去。 3)噬菌体感染大肠杆菌时，宿主酶识别cos位点，环化。 14
14 1、原 理： 1）在λ噬菌体的正常生命周期中，会产生由数百个λDNA拷 贝组成的多联体分子。前后两个λDNA基因组之间都是通过 cos位点连接起来的。 2）λ噬菌体具有的一种位点特异的切割体系(site-specific cutting system),又叫Ter体系，能识别两个相距适宜的cos位 点(38-45kb)，将多连体分子切割成λ单位长度的片段，并将 它们包装到λ噬菌体头部中去。 3） λ噬菌体感染大肠杆菌时，宿主酶识别cos位点，环化。 二、工作原理及步骤
出南大 噬菌体或病毒DNA 大肠杆菌的入噬菌体DNA 入噬菌体生物学特性： 感染周期 E.coli 裂解 吸附 LamB受体 包装 注入 复制 15
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大 入噬菌体生物学特性：感染周期 100个左右的拷贝 包装范围为原DNA的75-105% 体内包装 即36-51kb A 超 16
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4)在包装上限固定的条件下，大幅度缩短噬菌体DNA 的长度，就能同步增加载体的装载能力。将噬菌体 DNA与包装有关的序列与质粒组装在一起，既能最大 限度地缩短载体的长度，同时又能保证重组DNA分子 在体外仍被包装成有感染力的颗粒。当然，由于考斯质 园 粒不再携带包装蛋白基因，因此重组DNA分子在细胞 内不能形成噬菌体颗粒。 刷 17
17 4）在包装上限固定的条件下，大幅度缩短噬菌体DNA 的长度，就能同步增加载体的装载能力。将噬菌体 DNA与包装有关的序列与质粒组装在一起，既能最大 限度地缩短载体的长度，同时又能保证重组DNA分子 在体外仍被包装成有感染力的颗粒。当然，由于考斯质 粒不再携带包装蛋白基因，因此重组DNA分子在细胞 内不能形成噬菌体颗粒