南 2、 cosmid克隆的一般过程 ①用特定的核酸内切酶消化真核生物DNA。 ②用同样的内切酶消化cosmid载体。 ③连接 园 产物中将有一定比例的分子是两端各有一 个cos位点、长度40kb左右的真核DNA与载 体的连接物。 18
18 ①用特定的核酸内切酶消化真核生物DNA。 2、cosmid克隆的一般过程 ②用同样的内切酶消化cosmid载体。 产物中将有一定比例的分子是两端各有一 个cos位点、长度40kb左右的真核DNA与载 体的连接物。 ③连接
④Ter体系识别并切割 切割合适长度的杂种DNA连接物，并包装入噬菌体头 部。 ⑤感染大肠杆菌 注入到细菌体内的杂种DNA分子环化，并按 质粒的方式复制。 爱 ⑥抗性平板筛选 19
19 切割合适长度的杂种DNA连接物，并包装入噬菌体头 部。 注入到细菌体内的杂种DNA分子环化，并按 质粒的方式复制。 ⑤感染大肠杆菌 ④ Ter体系识别并切割 ⑥抗性平板筛选
cosmid载体 真核DNA N U N Amp 消化 消化载体 cos 酶切位点 Amprori cos 连接 圈 载体自 我连接 真核DNA 涵 自我连接 载体与真核DNA连接 20
20
载体与真核DNA连接 N U N 端化酶切、/包装 dwe 0r 噬菌体颗粒 浸 涵 感染大肠杆菌 超 21
21
南光 三、粘粒克隆载体 1.pJB8 简单粘粒，1981年，D.Ish-Horowice7和J.F.Burke 组成：amp ori cos MCS 园 5.4kb 可容纳33-46.5kb外源DNA片段 醒 22
22 三、粘粒克隆载体 1．pJB8 简单粘粒，1981年，D. Ish-Horowice和J.F. Burke 组成: amp ori cos MCS 5.4kb 可容纳33-46.5kb外源DNA片段