海南 BamΠ Tc PstI Ap SalI pHC79 6400bp 入fragment COS 1978年Collins和Hohn发明构建,1.8kb的-DNA片 段+pBR322片段,装载范g国为31-45kb
8 1978年Collins和Hohn发明构建,1.8 kb的l-DNA片 段 + pBR322片段,装载范围为31 - 45 kb
2、粘粒的特点 ①能象入-DNA一样体外包装,并高效导入受体细胞; ②可以装载比质粒或λ-DNA大得多的外源DNA片段,如 cos区及附近顺序长为1.7kb,质粒长为3.3kb,则该 柯斯质粒最大可装载46.5kb的外源DNA; ③由于携带质粒的选择标记,便于筛选; ④由于质粒上的多种单一酶切位点,便于克隆。 9
9 ① 能象λ-DNA一样体外包装,并高效导入受体细胞; ②可以装载比质粒或λ-DNA大得多的外源DNA片段,如 cos区及附近顺序长为1.7 kb,质粒长为3.3kb,则该 柯斯质粒最大可装载46.5kb的外源DNA; ③ 由于携带质粒的选择标记,便于筛选; ④ 由于质粒上的多种单一酶切位点,便于克隆。 2、粘粒的特点
南大 3、用途 >在构建基因文库中,减少文库中重组体的数目 >在单个重组体中克隆和增殖完整的(较大的)真核基因 鸡前a2胶原、鼠三氢叶酸还原酶(DHFR)至少40kb 入载体最大24kb,质粒载体虽可携带大片段,但转化率低。 >克隆与分析组成某一基因家族的真核DNA区段 涵 如:哺乳动物珠蛋白基因遍布于至少70kb的DNA片段中甚至有数十万 个bp(几百kb) 10
10 Ø在构建基因文库中,减少文库中重组体的数目 Ø在单个重组体中克隆和增殖完整的(较大的)真核基因 鸡前2胶原、鼠三氢叶酸还原酶(DHFR)至少40kb 载体最大24kb,质粒载体虽可携带大片段,但转化率低。 Ø克隆与分析组成某一基因家族的真核DNA区段 如:哺乳动物珠蛋白基因遍布于至少70kb的DNA片段中甚至有数十万 个bp(几百kb) 3、用途
在“步查”过程中,粘粒具有优势,是)文库的两倍,粘粒 可克隆45kb 染色体步查:chromosome walking 采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探 是 针以鉴定含有相邻序列的重组克隆。 湿 11
11 在“步查”过程中,粘粒具有优势,是文库的两倍,粘粒 可克隆45kb 染色体步查:chromosome walking 采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探 针以鉴定含有相邻序列的重组克隆
南 Sau3A1 漫 腿 12
12 Sau3A1