、生产动物细胞的获得 原代细胞、已建立的二倍体细胞系可无 限期传代的转化细胞系,以及用些细胞 进行融合和重组的工程细胞系。 1、原代细胞:是直接取自动物组织器官, 经过粉碎、消化而获得的细胞悬液。般 lg组织约有109个细胞。 2体细胞系:原代细胞经过传代、筛 梨隆,从而从多种细胞成分的组织中 挑化出某种具有一定特征的细胞株 转化胞系:失去了正常细胞的特点,可 以限增殖
二、生产动物细胞的获得 • 原代细胞、已建立的二倍体细胞系、可无 限期传代的转化细胞系，以及用这些细胞 进行融合和重组的工程细胞系。 • 1、原代细胞：是直接取自动物组织、器官， 经过粉碎、消化而获得的细胞悬液。一般 1g组织约有109个细胞。 • 2、二倍体细胞系：原代细胞经过传代、筛 选、克隆，从而从多种细胞成分的组织中 挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。 • 转化细胞系：失去了正常细胞的特点，可 以无限增殖
常用生产用动物细胞的特性 (1)W-38:1961年来源于女性高索人 正常胚肺组织的二倍体细胞系,2n=4 该细胞是成纤维细胞,能产生胶原增 基用BME( Eagle's basal medium)加 血清,pH控制在,2,同工酶为G6PDB型 细胞的倍增时间为24,有限寿命为50代 业世绝60年代被广泛用于制备疫苗 RC5:特性和用途与W13相似, 1966年来源呀14周正常男性,对多种人的 病毒敏感,用于疫苗的生产
三、常用生产用动物细胞的特性 • （1）WI-38：1961年来源于女性高加索人 正常胚肺组织的二倍体细胞系，核型2n=46。 该细胞是成纤维细胞，能产生胶原，培养 基用BME（Eagle’s basal medium）加小牛 血清，pH控制在7.2，同工酶为G6PD B型。 细胞的倍增时间为24h，有限寿命为50代， 上世纪60年代被广泛用于制备疫苗。 • （2）MRC-5：特性和用途与WI-38相似， 1966年来源于14周正常男性，对多种人的 病毒敏感，用于疫苗的生产
常用生产用动物细胞的特性 (3)CHOK1:1957年从中国地鼠巢中 分离的一株上皮样细胞。在封斧时加 8用酸核型为21202日前露 沟建工程细 疋 氢叶酸还原 酶的营养缺陷突变株 CHO-Chfr,它常用的 培养基为DMEM培养基,加01m次黄 嘌呤和0.01mmoL胸苷,以及10%小牛血
三、常用生产用动物细胞的特性 • （3）CHO-K1：1957年从中国地鼠卵巢中 分离的一株上皮样细胞。在培养时需加入 脯氨酸。核型为2n=20~22。目前广泛用于 构建工程细胞的是一株缺乏二氢叶酸还原 酶的营养缺陷突变株CHO-dhfr-，它常用的 培养基为DMEM培养基，加0.1 mol/L次黄 嘌呤和0.01m mol/L胸苷，以及10%小牛血 清
常用生产用动物细胞的特性 (4)BHK-21:1961年从5只据性别生长 1天的地鼠幼鼠的肾脏中分离的。 采用的是1935)单细胞分离的方 次的克隆的细胞。成纤维细胞,2n=4。通 常用的培养基为DMEM培养基,添加7胎 甜血清。过去多用于增殖病毒,包括多瘤 病毒、蹄疫病毒和狂犬病疫苗,现在已 被期判构建工程细胞
三、常用生产用动物细胞的特性 • （4）BHK-21：1961年从5只无性别的生长 1天的地鼠幼鼠的肾脏中分离的。现在广泛 采用的是1963年用单细胞分离的方法经13 次的克隆的细胞。成纤维细胞，2n=44。通 常用的培养基为DMEM培养基，添加7%胎 牛血清。过去多用于增殖病毒，包括多瘤 病毒、口蹄疫病毒和狂犬病疫苗，现在已 被用于构建工程细胞
常用生产用动物细胞的特性 (5)Vero:1962年来源于正常的成年非绿猴 肾。是贴壁依赖的成纤维细胞,2n=60高倍练 为共终地行:冠常第 多种病毒的增殖,包括脊髓灰质炎、狂尖病病毒, 已被批准用于人体 k60 Namalwa:1972年来源于肯尼亚惠有Buit 淋瘤酌病人体中,后在瑞典构建的一株人的类 细胞,高细胞有28%的高倍体率,多数细 胞有条标记染色体,单条ⅹ染色体,无Y染 色体通常用的培养基为RPMI1640,添加7% 牛血清用于大规模生产-干扰素
三、常用生产用动物细胞的特性 • （5）Vero：1962年来源于正常的成年非洲绿猴 肾。是贴壁依赖的成纤维细胞，2n=60，高倍体 率为1.7%，可持续地进行培养。通常用的培养基 为199培养基，添加5%胎牛血清。该细胞可支持 多种病毒的增殖，包括脊髓灰质炎、狂犬病病毒， 已被批准用于人体。 • （6）Namalwa：1972年来源于肯尼亚患有Burkitt 淋巴瘤的病人体中，后在瑞典构建的一株人的类 淋巴母细胞，高细胞有2.8%的高倍体率，多数细 胞有12~14条标记染色体，单条X染色体，无Y染 色体。通常用的培养基为RPMI 1640，添加7%胎 牛血清。用于大规模生产-干扰素