嘉1转化和转染（transformation/transfection）S rDNA导入原核细胞的过程称转化，导入真核（酵母）称转染。11111 transformation：质粒导入细菌的过程：11s transfection：噬菌体，病毒或以它作为载体构建的重组子导入真核细胞；TS transduction ：以噬菌体为媒介外源DNA分子导入原核细胞。E11111111111拉111/11111E111111
1 转化和转染（transformation/transfection） § rDNA导入原核细胞的过程称转化，导入真核（酵 母）称转染。 § transformation ：质粒导入细菌的过程； § transfection ：噬菌体，病毒或以它作为载体构建的 重组子导入真核细胞； § transduction ：以噬菌体为媒介外源DNA分子导入 原核细胞
2大肠杆菌作为基因工程宿主菌的优性8大肠杆菌是迄今为止研究得最详尽的原核生物S已被发展成为一种安全的基因工程实验体系，拥有各种宿主菌和载体。s培养简单，繁殖迅速，培养代谢易于控制，易于进行工业化批量生产。实验已经证明，许多克隆的真核基因，如生长激黏素基因和胰岛素基因等，都可在大肠杆菌中实现高效表达。A
2 大肠杆菌作为基因工程宿主菌的优越性 § 大肠杆菌是迄今为止研究得最详尽的原核生物。 § 已被发展成为一种安全的基因工程实验体系，拥 有各种宿主菌和载体。 § 培养简单，繁殖迅速，培养代谢易于控制，易于 进行工业化批量生产。 § 实验已经证明，许多克隆的真核基因，如生长激 素基因和胰岛素基因等，都可在大肠杆菌中实现 高效表达
1111T1113局限性11111S不具备真核生物的蛋白质复性系统111福SI缺乏真核生物蛋白质加工修饰系统11招崇11造S内源蛋白酶易降解空间构象不正确的异源蛋白，11111成表达产物不稳定111直11EE11福11111111111-11E111111
3 局 限 性 § 不具备真核生物的蛋白质复性系统 § 缺乏真核生物蛋白质加工修饰系统 § 内源蛋白酶易降解空间构象不正确的异源蛋白，造 成表达产物不稳定
吉4大肠杆菌感受态的制备与转化s感受态细胞(Competent cells):细胞膜的通透性发生变化S可能是CaCI,导致DNA分子沉淀到细菌细胞的外壁上，或者CaCl,与提高细菌结合的变化有关。S有时CaCl,只影响DNA的结合，并不影响细胞的吸收，当DNA分子加到处理的细胞内，仍然吸附在细胞的外部赢并没有转化到细胞质中，将DNA带入感受态细胞的条件可提高温度到42℃，同样热激处理可以提高效率的机理也不很清楚。11.111
4 大肠杆菌感受态的制备与转化 § 感受态细胞(Competent cells): 细胞膜的通透性发生变化。 § 可能是CaCl2导致DNA分子沉淀到细菌细胞的外壁上， 或者CaCl2与提高细菌结合的变化有关。 § 有时CaCl2只影响DNA的结合，并不影响细胞的吸收， 当DNA分子加到处理的细胞内，仍然吸附在细胞的外 部，并没有转化到细胞质中，将DNA带入感受态细胞 的条件可提高温度到42℃，同样热激处理可以提高效 率的机理也不很清楚
5转化率S转化率是衡量转化效率的重要指标，S定义：每微克载体DNA在最佳转化条件下进入受体细胞的分子数。由于在一般的转化实验规模下，每个受体细胞最多只能接受一个载体分子，因此转化率的定义也可以表征为：I每微克载体DNA转化后，受体细胞接纳（在筛选时，未接纳载体或DNA的个数，即克隆数重组子的受体细胞不长)1拉
5 转化率 § 转化率是衡量转化效率的重要指标， § 定义：每微克载体DNA在最佳转化条件下进入受体 细胞的分子数。 § 由于在一般的转化实验规模下，每个受体细胞最多 只能接受一个载体分子，因此转化率的定义也可以 表征为：每微克载体DNA转化后，受体细胞接纳 DNA的个数，即克隆数（在筛选时，未接纳载体或 重组子的受体细胞不长）