基本原理1①朗伯-比尔定律（Lambert-Beer’s Law）（又称吸收定律)：当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，其吸光度A与吸光物质的浓度C及吸收层厚度L成正比。A=ECLA为吸光度，E为摩尔吸光系数，C为吸光物质浓度，L为吸光溶液的厚度
Ø朗伯-比尔定律(Lambert-Beer’s Law)(又称吸收定 律)： 当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的 吸光物质时，其吸光度A与吸光物质的浓度C及吸收 层厚度L成正比。 A=εCL A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，C为吸光物质浓度，L 为吸光溶液的厚度。 （一）基本原理
(二）分光光度法的应用1、定量分析D标准曲线法①标准对照法秘釉①标准系数法--花-0回归分析法
（二）分光光度法的应用 Ø标准曲线法 Ø标准对照法 Ø标准系数法 Ø回归分析法 1、定量分析
①标准曲线法：测出配制一系列浓度由小到大的标准溶液，它们的吸光度。以各标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，在方格坐标纸上绘出的曲线，即标准稻曲线。相同条件测出待测样品的吸光度后，从标准曲线上可以直接查出其浓度。例：蛋白质定量实验
①标准曲线法： 配制一系列浓度由小到大的标准溶液，测出 它们的吸光度。以各标准溶液的浓度为横坐标，相应的 吸光度为纵坐标，在方格坐标纸上绘出的曲线，即标准 曲线。 相同条件测出待测样品的吸光度后，从标准曲 线上可以直接查出其浓度。 例：蛋白质定量实验
吉②标准比较法：在相同条件下，配制标准溶液和待测样品溶液，测定它们的吸光度。比较两者的吸光度，即可求出待测样品溶液的浓度C待测=C标准XA待测/A标准③标准系数法：标准系数A-&CL(&L)多次测量标准液后，求取A,再求标准系数福待测液浓度二待测液吸光度X标准系数
②标准比较法： 在相同条件下，配制标准溶液和待测样品溶液，测定它们 的吸光度。比较两者的吸光度，即可求出待测样品溶液的浓度。 ③标准系数法： A=εC L 多次测量标准液后，求取A，再求标准系数 待测液浓度=待测液吸光度×标准系数 (ε L) 1 标准系数 C待测=C标准×A待测/A标准
克④回归分析法3与其相应的吸光度，用回归将制作标准曲线的各种标准液浓度，将样品分析法求出一个回归方程式。以后，只要测定条件不变，液吸光度值代入该方程式，则可计算出样品液的浓度。12吸光值100o回归方程y=ax+b德-一德6a202121046810浓度
④回归分析法 将制作标准曲线的各种标准液浓度，与其相应的吸光度，用回归 分析法求出一个回归方程式。以后，只要测定条件不变，将样品 液吸光度值代入该方程式，则可计算出样品液的浓度。 吸光值 吸 光 值 回归方程 y=ax+b 浓度