3、酶法处理 用得最多的是溶菌酶,如在37℃,pH8.0下对小球 菌进行破壁处理,历时15分钟,即可提取核酸酶。也 有用脱氧核糖核酸酶处理,操作与溶菌酶同 酶的提取 1、水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取。一般在低温下操作。 在酸性条件下稳定的酶要在酸性条件下提取。一般来 说,碱性蛋白酶用酸性溶液提取,酸性蛋白酶用碱性 溶液提取
3、酶法处理 用得最多的是溶菌酶，如在37℃，pH8.0下对小球 菌进行破壁处理，历时15分钟，即可提取核酸酶。也 有用脱氧核糖核酸酶处理，操作与溶菌酶同。 二、酶的提取 1、水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取。一般在低温下操作。 在酸性条件下稳定的酶要在酸性条件下提取。一般来 说，碱性蛋白酶用酸性溶液提取，酸性蛋白酶用碱性 溶液提取
盐浓度一般以等渗为好,相当于0.15mol/ L Nacl 的离子强度是最适宜于酶的提取。 2、有机溶剂法 某些结合酶如微粒体和线粒体膜的酶,由于和脂 质牢固结合,为此必须除去结合的脂质,且不能使酶 变性,最常用的有机溶剂是丁醇。 3、表面活性剂法 表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中,故 可用于提取结合酶
盐浓度一般以等渗为好，相当于0.15mol／L NaCl 的离子强度是最适宜于酶的提取。 2、有机溶剂法 某些结合酶如微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂 质牢固结合，为此必须除去结合的脂质，且不能使酶 变性，最常用的有机溶剂是丁醇。 3、表面活性剂法 表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，故 可用于提取结合酶
酶制剂的工业提取法 (一)发酵液的预处理及过滤 微生物发酵液的分离,过滤,发酵液中加絮凝剂 或凝固剂。絮凝剂有聚丙烯酰胺、右旋糖酐和聚谷 氨酸。 (二)酶液的脱色 活性炭、脱色树脂。 (三)盐析法 用得最多的是(NH4)2SO4,在常温下不会造成酶 的失活,若分级沉淀应用得当,杂蛋白杂质也较少
三、酶制剂的工业提取法 （一）发酵液的预处理及过滤 微生物发酵液的分离，过滤，发酵液中加絮凝剂 或凝固剂 。絮凝剂有聚丙烯酰胺、右旋糖酐和聚谷 氨酸 。 （二）酶液的脱色 活性炭、脱色树脂 。 （三）盐析法 用得最多的是（NH4）2SO4，在常温下不会造成酶 的失活，若分级沉淀应用得当，杂蛋白杂质也较少
(四)有机溶剂法 有机溶剂沉淀蛋白质的能力为丙酮>异丙醇>乙 醇>甲醇。工业上通常采用乙醇作为沉淀剂。 (五)喷雾干燥直接制备粉末酶制剂 喷雾干燥用于干燥菌体,药用酶常用冷冻干燥 四、酶的纯化 评价纯化工艺主要看二个指标,一是酶比活,二 是总活力回收
（四）有机溶剂法 有机溶剂沉淀蛋白质的能力为丙酮＞异丙醇＞乙 醇＞甲醇 。工业上通常采用乙醇作为沉淀剂。 （五）喷雾干燥直接制备粉末酶制剂 喷雾干燥用于干燥菌体，药用酶常用冷冻干燥。 四、酶的纯化 评价纯化工艺主要看二个指标，一是酶比活，二 是总活力回收
酶在纯化过程中的一些技术难点: (一)杂质的除去 酶提取液中,除所需酶外,还含有大量的杂蛋白 多糖、脂类和核酸等 (1)pH和加热沉淀法 (2)蛋白质表面变性法利用蛋白质表面变性性质的 差别,也可除去杂蛋白,加入氯仿和乙醇进行震荡, 可以除去杂蛋白
酶在纯化过程中的一些技术难点： （一）杂质的除去 酶提取液中，除所需酶外，还含有大量的杂蛋白、 多糖、脂类和核酸等 。 （1）pH和加热沉淀法 （2）蛋白质表面变性法 利用蛋白质表面变性性质的 差别，也可除去杂蛋白，加入氯仿和乙醇进行震荡， 可以除去杂蛋白