判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素的量用内毒素单位 (EU)表示 细菌内毒素检查包括凝胶法和光度测定法两种方法,前者利用鲎试剂与细菌内毒素 生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素,后者包括浊度法和显色基质法,系分别利F 鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少 来测定内毒素 鲎试剂法检查内毒素的灵敏度为0.0001μg/m1,比家兔法灵敏10倍,操作简单易行, 试验费用低,结果迅速可靠,适用于注射剂生产过程中的热原控制和家兔法不能检测的某 些细胞毒性药物制剂,但其对革兰阴性菌以外的内毒素不灵敏,目前尚不能完全代替家兔 【相关链接】污染热原的途径 第三节灭菌 45min 教具:幻灯、图 灭菌系指采用适当的物理或化学方法杀灭或除去物体上或物品中活的微生物(包括紧片 殖体和芽孢》的过程。微生物包括细菌、真菌、病毒等,微生物的种类不同、灭菌方法不方法:讲投、板 同,灭菌效果也不同,细菌的芽孢具有较强的抗热能力,因此灭菌效果常以杀灭芽孢为标书、归纳、比较 准。灭菌是药剂制备中一项重要的操作,对于注射剂、眼用制剂及应用于创面的制剂等无 菌制剂是不可缺少的环节。药剂学中采用的灭菌措施必须达到既要除去或杀灭微生物,又 要保证药物的稳定性、治疗作用及安全性的基本要求。 灭菌方法 -)物理灭菌法 1.干热灭菌法 干热灭菌法是利用火焰或干热空气进行灭菌的方法,其原理是利用高温破坏菌体蛋 白质与核酸中的氢键,使蛋白质变性或凝固、核酸破坏、酶失去活性,微生物死亡, (1)火焰灭菌法。是将待灭菌物品直接置于火焰中烧灼进行灭菌的方法,灭菌迅 速、可靠、简便,适用于耐火焰材质的物品如金属、玻璃用具或容器及瓷器等的灭菌,不 能用于药品的灭菌。 2)干热空气灭菌法。是将待灭菌物品置于高温干热空气中灭菌的方法,需要长时 间高热环境才能达到灭菌效果。适用于耐高温材质的物品(玻璃、金属制品等)及耐高温 不允许湿气穿透的油脂类和粉末化学药品。干热空气灭菌条件一般为:135~145℃灭菌 3~5h:l60~170℃灭菌2~4h:180~200℃灭菌0.5~h。欲破坏热原则需180℃3~4h 200℃6mi或250℃30~45min。常见的热空气灭菌柜(见教材图5-4) 2.湿热灭菌法 湿热灭菌法是将待灭菌物品置于饱和蒸气或流通蒸气或沸水中进行灭菌的方法。饱和 蒸气潜热大,穿透力强,容易使蛋白质变性或凝固、酶失活,灭菌效率较干热空气灭菌法
判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素的量用内毒素单位 （EU）表示。 细菌内毒素检查包括凝胶法和光度测定法两种方法，前者利用鲎试剂与细菌内毒素 产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素，后者包括浊度法和显色基质法，系分别利用 鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少 来测定内毒素。 鲎试剂法检查内毒素的灵敏度为 0.0001μg/ml,比家兔法灵敏 10倍，操作简单易行， 试验费用低，结果迅速可靠，适用于注射剂生产过程中的热原控制和家兔法不能检测的某 些细胞毒性药物制剂，但其对革兰阴性菌以外的内毒素不灵敏，目前尚不能完全代替家兔 法。 【相关链接】污染热原的途径 第三节 灭菌 灭菌系指采用适当的物理或化学方法杀灭或除去物体上或物品中活的微生物（包括繁 殖体和芽孢）的过程。微生物包括细菌、真菌、病毒等，微生物的种类不同、灭菌方法不 同，灭菌效果也不同。细菌的芽孢具有较强的抗热能力，因此灭菌效果常以杀灭芽孢为标 准。灭菌是药剂制备中一项重要的操作，对于注射剂、眼用制剂及应用于创面的制剂等无 菌制剂是不可缺少的环节。药剂学中采用的灭菌措施必须达到既要除去或杀灭微生物，又 要保证药物的稳定性、治疗作用及安全性的基本要求。 一、 灭菌方法 （一）物理灭菌法 1．干热灭菌法 干热灭菌法是利用火焰或干热空气进行灭菌的方法，其原理是利用高温破坏菌体蛋 白质与核酸中的氢键，使蛋白质变性或凝固、核酸破坏、酶失去活性，微生物死亡。 （1）火焰灭菌法。是将待灭菌物品直接置于火焰中烧灼进行灭菌的方法，灭菌迅 速、可靠、简便，适用于耐火焰材质的物品如金属、玻璃用具或容器及瓷器等的灭菌，不 能用于药品的灭菌。 （2）干热空气灭菌法。是将待灭菌物品置于高温干热空气中灭菌的方法，需要长时 间高热环境才能达到灭菌效果。适用于耐高温材质的物品（玻璃、金属制品等）及耐高温、 不允许湿气穿透的油脂类和粉末化学药品。干热空气灭菌条件一般为：135～145℃灭菌 3～5h；160～170℃灭菌 2～4h；180～200℃灭菌 0.5～1h。欲破坏热原则需 180℃3～4h、 200℃60min 或 250℃30～45min。常见的热空气灭菌柜(见教材图 5-4）： 2．湿热灭菌法 湿热灭菌法是将待灭菌物品置于饱和蒸气或流通蒸气或沸水中进行灭菌的方法。饱和 蒸气潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固、酶失活，灭菌效率较干热空气灭菌法 45min 教具：幻灯、图 片 方法：讲授、板 书、归纳、比较
(1)热压灭菌法。是指用压力高于常压的饱和水蒸气加热杀灭微生物的方法。该 灭菌可靠,能杀灭所有细菌繁殖体和芽孢,广泛用于药物制剂的生产。凡耐高温、耐高 压蒸气的药物制剂、金属或玻璃容器及用具、瓷器、橡胶塞、膜滤器等均能采用此法。热 压灭菌条件(温度、蒸气表压与时间)为:115℃(67kPa),30min:121℃(97kPa),20min 126℃(139kPa),15min。 【相关链接】卧式热压灭菌柜的操作方法和使用注意事项 【相关链接】影响湿热灭菌的因素 3.射线灭菌法 (1)辐射灭菌法。以放射性同位素(Co或Cs)放射的y射线杀菌的方法。原理 是射线可直接破坏细菌DNA,导致微生物死亡。辐射灭菌的特点是不升高灭菌产品的温度 穿透性强,适合于维生素、抗生素、激素、肝素、羊肠线、医疗器械、高分子材料等的灭 (2)紫外线灭菌法。指用波长200~300n的紫外线照射杀灭微生物的方法,灭菌 力最强的波长是254m。是利用紫外线作用于菌体核酸蛋白促使其变性,同时空气受紫外 照射后产生微量臭氧,共同起杀菌作用。本法适用于表面灭菌、无菌室的空气灭菌。缺 点是穿透力差,不能用于安瓿中药液灭菌。操作者应注意劳动保护,皮肤和眼睛不能暴露 于紫外线下,否则照射过久会引起结膜炎、红斑和角膜灼伤等疾病 (3)微波灭菌法。采用频率300MHz~300kMHz的电磁波照射产生热能杀灭微生物 的方法。是利用极性分子强烈吸收微波能量后剧烈旋转、摩擦生热,达到灭菌效果。适用 于水性注射液灭菌 4.滤过除菌法 滤过除菌法是指用滤过方法除去活的或死的微生物的方法,是一种机械除菌方法。这 种机械称为除菌滤过器,主要适用于对热不稳定的药物溶液、气体、水等的除菌。供除菌 用的滤器,要求能有效地从溶液中除净微生物,溶液能顺畅地通过,容易清洗,操作简便 常用除菌滤器有0.22恤或0.3的微孔滤膜或G垂熔玻璃滤器。此法应配合无菌操作法 进行 (二)化学灭菌法 化学灭菌法是指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法。化学杀菌剂不能 杀死芽孢,仅对繁殖体有效。化学杀菌的目的在于减少微生物的数目,以控制无菌状况至 定水平 1.气体灭菌法 气体灭菌法是指用化学药品的气体或蒸气杀灭微生物的方法。常用气态杀菌剂为环 氧乙烷、甲醛、丙二醇、臭氧、乳酸、过氧乙酸等。该法适用于环境消毒和不耐热的医药 用器具、设施、设备及不与杀菌剂发生反应的固体药物
高。 （1）热压灭菌法。是指用压力高于常压的饱和水蒸气加热杀灭微生物的方法。该 法灭菌可靠，能杀灭所有细菌繁殖体和芽孢，广泛用于药物制剂的生产。凡耐高温、耐高 压蒸气的药物制剂、金属或玻璃容器及用具、瓷器、橡胶塞、膜滤器等均能采用此法。热 压灭菌条件（温度、蒸气表压与时间）为：115℃（67kPa），30min；121℃（97kPa），20min； 126℃（139 kPa），15min。 【相关链接】卧式热压灭菌柜的操作方法和使用注意事项 【相关链接】影响湿热灭菌的因素 3．射线灭菌法 （1）辐射灭菌法。以放射性同位素（60Co 或 137Cs）放射的γ射线杀菌的方法。原理 是射线可直接破坏细菌 DNA，导致微生物死亡。辐射灭菌的特点是不升高灭菌产品的温度， 穿透性强，适合于维生素、抗生素、激素、肝素、羊肠线、医疗器械、高分子材料等的灭 菌。 （2）紫外线灭菌法。指用波长 200～300nm 的紫外线照射杀灭微生物的方法，灭菌 力最强的波长是 254nm。是利用紫外线作用于菌体核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外 线照射后产生微量臭氧，共同起杀菌作用。本法适用于表面灭菌、无菌室的空气灭菌。缺 点是穿透力差，不能用于安瓿中药液灭菌。操作者应注意劳动保护，皮肤和眼睛不能暴露 于紫外线下，否则照射过久会引起结膜炎、红斑和角膜灼伤等疾病。 （3）微波灭菌法。采用频率 300MHz～300kMHz 的电磁波照射产生热能杀灭微生物 的方法。是利用极性分子强烈吸收微波能量后剧烈旋转、摩擦生热，达到灭菌效果。适用 于水性注射液灭菌。 4．滤过除菌法 滤过除菌法是指用滤过方法除去活的或死的微生物的方法，是一种机械除菌方法。这 种机械称为除菌滤过器，主要适用于对热不稳定的药物溶液、气体、水等的除菌。供除菌 用的滤器，要求能有效地从溶液中除净微生物，溶液能顺畅地通过，容易清洗，操作简便。 常用除菌滤器有 0.22µm 或 0.3µm 的微孔滤膜或 G6 垂熔玻璃滤器。此法应配合无菌操作法 进行。 （二）化学灭菌法 化学灭菌法是指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法。化学杀菌剂不能 杀死芽孢，仅对繁殖体有效。化学杀菌的目的在于减少微生物的数目，以控制无菌状况至 一定水平。 1．气体灭菌法 气体灭菌法是指用化学药品的气体或蒸气杀灭微生物的方法。常用气态杀菌剂为环 氧乙烷、甲醛、丙二醇、臭氧、乳酸、过氧乙酸等。该法适用于环境消毒和不耐热的医药 用器具、设施、设备及不与杀菌剂发生反应的固体药物
2.药液灭菌法 药液灭菌法利用药液杀灭微生物的方法。常用的有0.1%~0.2%苯扎溴铵溶液,75% 乙醇、丶%煤酚皂溶液、1%聚维酮碘溶液等 二、常用灭菌参数 【拓展提高】D 在检品中存在微量的微生物时,往往难以用现行的无菌检查法检出。因此,有必要值与Z值的数 对灭菌方法的可靠性进行验证。F与F值可作为验证灭菌可靠性的参数。 学表达式 (一)D值与Z值 值是指在一定温度下,杀灭90%微生物(或残存率为10%)所需的灭菌时间。在 定灭菌条件下,不同微生物具有不同的D值:同一微生物在不同灭菌条件下,D值亦不相 同。因此D值随微生物的种类、环境和灭菌温度变化而异。 Z值是指灭菌时间减少到原来的1/0所需升高的温度或在相同灭菌时间内,杀灭99% 【拓展提高】影 响Fo值的因素 的微生物所需提高的温度。 (二)F值与F值 1.F值 值为在一定温度(T)下,给定Z值所产生的灭菌效果与在参比温度(T)下给定 Z值所产生的灭菌效果相同时,所相当的灭菌时间,以min为单位。F值常用于干热灭菌 F值的数学表达式如下: F=△t∑102 (式5-6) 式中,Δt为测量被灭菌物温度的时间间隔,一般为0.5~1min,T为每个时间间隔 Δt所测得被灭菌物温度,T为参l F。值为一定灭菌温度(T)下,Z为10℃时所产生的灭菌效果与121℃,Z值为10℃ 所产生的灭菌效果相同时所相当的时间(min)。也就是说,不管温度如何变化,t分钟内 的灭菌效果相当于在121℃下灭菌F0分钟的效果。 在湿热灭菌时,参比温度定为121℃,以嗜热脂肪芽孢杆菌作为微生物指示菌,该 菌在121℃时,Z值为10℃。则 F0=△t∑10 (式5-7) 显然,即把各温度下灭菌效果都转化成121℃下灭菌的等效值。因此称F为标准灭 菌时间(min)。F目前仅应用于热压灭菌。 三、无菌操作法 无菌操作法是整个过程在无菌条件下进行的一种操作方法。无菌操作需在无菌操作室 或无菌柜内进行,操作所用的一切用具、材料以及环境,均需灭菌:严格遵守操作规程, 物料在无菌状态下送入室内:人流与物流要分离,避免交叉污染。小量无菌制剂的制备 普遍采用层流洁净工作台(见教材图5-5),使用方便,效果可靠。无菌操作法适用于制备 不耐热的药物注射剂、眼用溶液、眼用软膏或皮试液等。用无菌操作法制备的注射剂,大
2．药液灭菌法 药液灭菌法利用药液杀灭微生物的方法。常用的有 0.1%～0.2%苯扎溴铵溶液，75% 乙醇、2%煤酚皂溶液、1%聚维酮碘溶液等。 二、常用灭菌参数 在检品中存在微量的微生物时，往往难以用现行的无菌检查法检出。因此，有必要 对灭菌方法的可靠性进行验证。F 与 F0值可作为验证灭菌可靠性的参数。 （一）D 值与 Z 值 D 值是指在一定温度下，杀灭 90%微生物（或残存率为 10%）所需的灭菌时间。在一 定灭菌条件下，不同微生物具有不同的 D 值；同一微生物在不同灭菌条件下，D 值亦不相 同。因此 D 值随微生物的种类、环境和灭菌温度变化而异。 Z 值是指灭菌时间减少到原来的 1/10 所需升高的温度或在相同灭菌时间内，杀灭 99% 的微生物所需提高的温度。 （二）F 值与 F0值 1．F 值 F 值为在一定温度（T）下，给定 Z 值所产生的灭菌效果与在参比温度（T0）下给定 Z 值所产生的灭菌效果相同时，所相当的灭菌时间，以 min 为单位。F 值常用于干热灭菌。 F 值的数学表达式如下： Z T T F t 0 10 − = （式 5-6） 式中，Δt 为测量被灭菌物温度的时间间隔，一般为 0.5～1min，T 为每个时间间隔 Δt 所测得被灭菌物温度，T0为参比温度。 2．F0值 F0值为一定灭菌温度（T）下，Z 为 10℃时所产生的灭菌效果与 121℃，Z 值为 10℃ 所产生的灭菌效果相同时所相当的时间（min）。也就是说，不管温度如何变化，t 分钟内 的灭菌效果相当于在 121℃下灭菌 F0 分钟的效果。 在湿热灭菌时，参比温度定为 121℃，以嗜热脂肪芽孢杆菌作为微生物指示菌，该 菌在 121℃时，Z 值为 10℃。则： 10 121 0 10 − = T F t （式 5-7） 显然，即把各温度下灭菌效果都转化成 121℃下灭菌的等效值。因此称 F0为标准灭 菌时间（min）。F0目前仅应用于热压灭菌。 三、无菌操作法 无菌操作法是整个过程在无菌条件下进行的一种操作方法。无菌操作需在无菌操作室 或无菌柜内进行，操作所用的一切用具、材料以及环境，均需灭菌；严格遵守操作规程， 物料在无菌状态下送入室内；人流与物流要分离，避免交叉污染。小量无菌制剂的制备， 普遍采用层流洁净工作台(见教材图 5-5），使用方便，效果可靠。无菌操作法适用于制备 不耐热的药物注射剂、眼用溶液、眼用软膏或皮试液等。用无菌操作法制备的注射剂，大 【拓展提高】D 值与 Z 值的数 学表达式 【拓展提高】影 响 F0 值的因素
多需加入抑菌 【相关链接】无菌室的灭菌和无菌检查法 第四节注射剂的制备 90min 教具:幻灯、图 注射剂的生产工艺流程(见图5-6)。 片 、生产环境 方法:讲授、图 注射剂的生产按照GP进行管理,严格控制生产环境,按照生产工艺流程进行操作。示、板书归纳 (一)洁净室的设计 比较 洁净室内的设备布置尽量紧凑,以减小洁净室的面积。洁净室外部应设有厕所、 洗澡室、更衣室、缓冲室、风淋室等,不同级别洁净室应按洁净度从低到高安排,在 符合生产工艺流程前提下,明确人流、物流和空气流向,以确保洁净室内的洁净度要 求。洁净室内一般不设窗户,洁净室门应密闭,并向洁净度高的方向开启:洁净室的 墙壁、天花板、地面交界处应成弧形,天花板、风口、管线等连接部位应密封:洁净 空间对于其相邻空间应保持相对正压,静压差应大于5Pa,洁净室(区)与室外大气 的静压差应大于10Pa,并应有指示压差的装置,室内温度一般控制在18~26℃,相 对湿度控制在45~65%之间。 (二)空气滤过 为了达到洁净室内空气净化的目的,安装空调系统是基本的手段。经过空调系统 滤过、除湿、加热等处理,可得到基本无尘土、无菌、清洁新鲜的空气。空气过滤方 式分为表面过滤和深层过滤。层流洁净空气技术是较为理想的洁净技术,包括水平层 流和垂直层流(见教材图5-7a,图5-7b),可使室内存留的粒子保持在层流中运动, 不易碰撞结成大粒子,无死角,同时可除去室内新产生的粉尘,洁净度可达100级 目前己广泛使用。为保证注射剂生产环境的洁净度符合要求,必须采用空气净化系统 或局部净化设备。一般采用局部净化,要求较高时可采用全面净化或局部净化与全面 争化相结合的方式 (三)空气洁净技术与洁净室的标准 空气洁净技术是以创造洁净空气为目的而采用的综合性净化方法和技术。空气的 洁净要求包括工业洁净和生物洁净。我国《药品生产质量管理规范》(GⅧP)对药品生 产区域的净化度标准划分为四个级别,即100级、10000、100000和30000级(表 【相关链接】工业洁净和生物洁净 【相关链接】洁净室的空气含尘浓度测定方法 (四)洁净室(区)的管理 (1)洁净室(区)内人员数量应严格控制。其工作人员(包括维修、辅助人员)应 定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核:对进入洁净室(区)
多需加入抑菌剂。 【相关链接】无菌室的灭菌和无菌检查法 第四节 注射剂的制备 注射剂的生产工艺流程(见图 5-6)。 一、生产环境 注射剂的生产按照 GMP 进行管理，严格控制生产环境，按照生产工艺流程进行操作。 （一）洁净室的设计 洁净室内的设备布置尽量紧凑，以减小洁净室的面积。洁净室外部应设有厕所、 洗澡室、更衣室、缓冲室、风淋室等，不同级别洁净室应按洁净度从低到高安排，在 符合生产工艺流程前提下，明确人流、物流和空气流向，以确保洁净室内的洁净度要 求。洁净室内一般不设窗户，洁净室门应密闭，并向洁净度高的方向开启；洁净室的 墙壁、天花板、地面交界处应成弧形，天花板、风口、管线等连接部位应密封；洁净 室空间对于其相邻空间应保持相对正压，静压差应大于 5Pa，洁净室（区）与室外大气 的静压差应大于 10 Pa，并应有指示压差的装置，室内温度一般控制在 18～26℃，相 对湿度控制在 45～65％之间。 （二）空气滤过 为了达到洁净室内空气净化的目的，安装空调系统是基本的手段。经过空调系统 滤过、除湿、加热等处理，可得到基本无尘土、无菌、清洁新鲜的空气。空气过滤方 式分为表面过滤和深层过滤。层流洁净空气技术是较为理想的洁净技术，包括水平层 流和垂直层流(见教材图 5-7a，图 5-7b），可使室内存留的粒子保持在层流中运动， 不易碰撞结成大粒子，无死角，同时可除去室内新产生的粉尘，洁净度可达 100 级。 目前已广泛使用。为保证注射剂生产环境的洁净度符合要求，必须采用空气净化系统 或局部净化设备。一般采用局部净化，要求较高时可采用全面净化或局部净化与全面 净化相结合的方式。 （三）空气洁净技术与洁净室的标准 空气洁净技术是以创造洁净空气为目的而采用的综合性净化方法和技术。空气的 洁净要求包括工业洁净和生物洁净。我国《药品生产质量管理规范》（GMP）对药品生 产区域的净化度标准划分为四个级别，即100级、10000级、100000级和300000级（表 5-6）。 【相关链接】工业洁净和生物洁净 【相关链接】洁净室的空气含尘浓度测定方法 （四）洁净室（区）的管理 （1）洁净室（区）内人员数量应严格控制。其工作人员（包括维修、辅助人员）应 定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核；对进入洁净室（区） 90min 教具：幻灯、图 片 方法：讲授、图 示、板书、归纳、 比较