第三节基因工程工具酶(一）限制性内切酶（4)一些限制性酶切酶的识别位点(1)酶识别位点产生的未端类型3突出BbuIGCATGCCGTACG切割后，DNA末端的一条链3突出SfilGGCCNNNNNGGCC多出一至几个CCGGNNNNNCCGG核苷酸，成为5突出GAATTCEcoRI突出末端，又CTTAAG称粘性末端5'突出AAGCTTHind IIITTCGAA16
16 第三节. 基因工程工具酶 （一）限制性内切酶 (4) 一些限制性酶切酶的识别位点(1) 酶 识别位点 产生的末端类型 Bbu I GCATGC 3’突出 CGTACG Sfi I GGCCNNNNNGGCC 3’突出 CCGGNNNNNCCGG EcoR I GAATTC 5’突出 CTTAAG Hind III AAGCTT 5’突出 TTCGAA 切割后，DNA 末端的一条链 多出一至几个 核苷酸，成为 突出末端，又 称粘性末端
第三节基因工程工具酶(一)限制性内切酶(5)一些限制性酶切酶的识别位点（2）酶识别位点产生的末端类型条产整分为切链两的子平两生平割时端平末端AluIAGCTTCGADNA平末端GTTAACHap I称GAATTG平末端17
17 第三节. 基因工程工具酶 （一）限制性内切酶 (5) 一些限制性酶切酶的识别位点(2) 酶 识别位点 产生的末端类型 Alu I AGCT 平末端 TCGA Hap I GTTAAC 平末端 GAATTG 切割两条 链时生产 两端平整 的 DNA 分 子 ， 称 为 平末端
第三节基因工程工具酶(二）连接酶（1)用于将两段乃至数段DNA片段拼接起来的酶称为连接酶它催化DNA5'一磷酸基与3一羟基之间形成磷酸二酯键。体外DNA片段的连接方式：(1用DNA连接酶连接具有互补粘性未端的DNA片段(2)J用T.DNA连接酶将平端的DNA片段连接起来(3)先在DNA片段的末端加上化学合成的衔接物或接头：使之形成粘性未端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。DNA连接酶不能连接两条单链的DNA分子或环化单链的DNA分子，被连接的DNA链必须是双螺旋DNA分子的一一部分。18
18 第三节. 基因工程工具酶 （二）连接酶 (1) 体外DNA片段的连接方式： （1）用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段 （2）用T4DNA连接酶将平端的DNA片段连接起来 （3）先在DNA片段的末端加上化学合成的衔接物或接头， 使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连 接起来。 DNA连接酶不能连接两条单链的DNA分子或环化单链的 DNA分子，被连接的 DNA链必须是双螺旋DNA分子的一 部分。 用于将两段乃至数段DNA片段拼接起来的酶称为连接酶。 它催化DNA 5’－磷酸基与3’－羟基之间形成磷酸二酯键
第三节基因工程工具酶（三）修饰酶（1）1.DNA聚合酶（DNAPolymerase)能够将脱氧核糖核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链的3'-OH未端催化核替酸的聚合作用，而不发生引物从膜版上的解离作用。DNA聚合酶DNA-OHDNA-(pdN)n+nPPidATP,dTTP,dCTP,dGTP,Mg?+19
19 第三节. 基因工程工具酶 （三）修饰酶 (1) 1. DNA聚合酶 (DNA Polymerase) 能够将脱氧核糖核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链 的3’-OH末端催化核苷酸的聚合作用，而不发生引物从 膜版上的解离作用。 DNA-OH DNA-(pdN)n ＋ nPPi dATP，dTTP，dCTP，dGTP，Mg2＋ DNA聚合酶
第三节基因工程工具酶（三）修饰酶（2)DNA聚合酶在基因工程中的用途1)DNA分子的体外合成2）体外突变3)DNA片段探针的标记4)DNA的序列分析5)DNA分子的修复6)聚合酶链式反应(PCR）等20
20 第三节. 基因工程工具酶 （三）修饰酶 (2) DNA聚合酶在基因工程中的用途： 1) DNA分子的体外合成 2) 体外突变 3) DNA片段探针的标记 4) DNA的序列分析 5) DNA分子的修复 6) 聚合酶链式反应(PCR)等