第三节聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)PCR是模拟体内DNA复制条件，应用DNA聚合酶反应，特异性扩增某一DNA片段的技术。体外程序化的DNA合成技术
1 第三节 聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR） ⚫ PCR是模拟体内DNA复制条件，应用DNA聚 合酶反应，特异性扩增某一DNA片段的技 术。 ⚫ 体外程序化的DNA合成技术
PCRseparated complementary DNA strands53definedprimers35DNA synthesis375513Xnucleotide pairs
2 PCR
原理：合成待扩增区域两端已知序列，与模板DNA互补D的寡核苷酸特异性引物，引物的序列决定扩增片段的长度；2）反应体系：DNA模板，dNTP，TaqDNA聚合酶buffer3）反应程序：变性94~9500复性延伸37~55.0C70~72.0072 oC延伸10minDNA扩增100万倍
3 原 理： 1）合成待扩增区域两端已知序列，与模板DNA互补 的寡核苷酸特异性引物，引物的序列决定扩增片 段的长度； 2）反应体系：DNA模板，dNTP，Taq DNA聚合酶， buffer 3）反应程序： 变性94~95oC 复性 延伸 37~55 oC 70~72 oC 72 oC延伸10min DNA扩增100万倍
PCR扩增DNAsepnrateDNAsynthesisstrandsandannealDNAseparate DNAprimersttands andannenisynthesisetc.primerDNAseparateDNAstrands andannealsynthesisetoprimeretcetcetceteIragmentotetcchromosomalDNAetcFIRST CYCLETHIRD CYCLESECONDCYCLE12dauble-stranded DNAmolecules?4double-strandedoNAmotocules18doublo-strindedDNAmolecues
4 PCR扩增
PCR特点及应用：特点：(1)特异性强，灵敏度高，稳定可靠，快速;2)微量的模板DNA即可扩增大量产物：应用：(1）基因组DNA分析：(2)遗传物质的鉴定；(3)遗传病的诊断；缺点：(1)需靶DNA序列的信息；(2)产物短小，DNA复制不精确
5 PCR特点及应用： 特点：（1）特异性强，灵敏度高，稳定可靠，快 速； 2）微量的模板DNA即可扩增大量产物; 应用：（1）基因组DNA分析； （2）遗传物质的鉴定； （3）遗传病的诊断; 缺点：（1）需靶DNA序列的信息； （2）产物短小，DNA复制不精确