免疫学及免疫学检验 免疫电泳技术 毛旭虎 ●医学检验系临床微生物学及免疫学教研室 二OO二年四月
免疫学及免疫学检验 免疫电泳技术 毛旭虎 ⚫ 医学检验系临床微生物学及免疫学教研室 ⚫ 二OO二年四月
免疫学及免疫学检验 第一节概述 免疫电泳技术实质上是直流电场作用下的凝胶 扩散试验 Grabar和 Williams于1953年首先将凝胶扩散置于直流 电场中进行,让电流加速抗原和抗体的扩散,并规定其 运动方向,从而使这种沉淀反应时间大缩短,敏感度显 著提高。随着现代生物学医学科学技术的发展,免疫电 泳技术有了新的发展,应用范围日益扩大,不仅用于人 与动物血清蛋白、各组织器官抗原成分及抗体的分析, 也用于细菌、植物性抗原、酶与激素的检测
免疫学及免疫学检验 第一节 概述 免疫电泳技术实质上是直流电场作用下的凝胶 扩散试验。 Grabar和Williams于1953年首先将凝胶扩散置于直流 电场中进行，让电流加速抗原和抗体的扩散，并规定其 运动方向，从而使这种沉淀反应时间大缩短，敏感度显 著提高。随着现代生物学医学科学技术的发展，免疫电 泳技术有了新的发展，应用范围日益扩大，不仅用于人 与动物血清蛋白、各组织器官抗原成分及抗体的分析， 也用于细菌、植物性抗原、酶与激素的检测
免疫学及免疫学检验 电泳的原理 带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移 动,这种现象称为电泳。抗体及大多数抗原是 蛋白质,具有许多可解离的酸性和碱性基团如 COO及NH等,在一定pH条件下,这种两 性电解质解离成为带正电或负电的质点,其泳 动方向和泳动速度与本身净电荷量、颗粒大小 形状等有关。所带净电荷量越多,颗粒越小, 泳动速度越快
免疫学及免疫学检验 ⚫ 一、电泳的原理 ⚫ 带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移 动，这种现象称为电泳。抗体及大多数抗原是 蛋白质，具有许多可解离的酸性和碱性基团如 COO—及NH3 +等，在一定pH条件下，这种两 性电解质解离成为带正电或负电的质点，其泳 动方向和泳动速度与本身净电荷量、颗粒大小、 形状等有关。所带净电荷量越多，颗粒越小， 泳动速度越快
免疫学及免疫学检验 二、影响因素 1.电场强度是指每厘米的电位降,以Vcm表 示。电泳时,可采用恒定电流,变动电压 也可恒定电压,变动电流。I=V/R,恒定电压 时,因R不断下降,所以电流增高,颗粒移动 速度和热效应也增大。通常采用电压在 2~10V/cm;当恒定电流时,由于R不断下降, 因此,Ⅴ也随之下降,从而蒸发较少,热效应 也小,移动率接近恒定。因此恒定电流要比 亘定电压好。常用电流为2~4mA(cm
免疫学及免疫学检验 二、影响因素 1. 电场强度 是指每厘米的电位降，以V/cm表 示。电泳时，可采用恒定电流，变动电压； 也可恒定电压，变动电流。I=V/R，恒定电压 时，因R不断下降，所以电流增高，颗粒移动 速 度和 热效应 也增大 。通 常采用 电压 在 2~10V/cm；当恒定电流时，由于R不断下降， 因此，V也随之下降，从而蒸发较少，热效应 也小，移动率接近恒定。因此恒定电流要比 恒定电压好。常用电流为2~4mA/cm
免疫学及免疫学检验 2.溶液pH值溶液pH值决定蛋白质带电 荷种类和数量。pH离等电点越远,离子 解离越多,泳动速度越快,反之则越慢 为了使电泳速度恒定,必须采用缓冲溶 液。由于大多数蛋白质的等电点较低, 一般电泳所采用的缓冲溶液均偏碱性, 因而使大部分的分子带负电荷
免疫学及免疫学检验 2. 溶液pH值 溶液pH值决定蛋白质带电 荷种类和数量。pH离等电点越远，离子 解离越多，泳动速度越快，反之则越慢。 为了使电泳速度恒定，必须采用缓冲溶 液。由于大多数蛋白质的等电点较低， 一般电泳所采用的缓冲溶液均偏碱性， 因而使大部分的分子带负电荷