Primer 5 -OH CTAAGCTCGACT Template dCTP,dGTP,dATP,dTTP ◆ddATP ◆ddcTP ◆ddGTP ◆daTTP -GATTCAGCTGddA -GATTCGAGdd日 GATTCGAGCTddG GATTCGAGCT -GATTCGdA GATTddc GATTCCAddG GATadT GddA 《tlT 3 210087654321 4OH0O4CCHH 合 Autoradiogram of Sequence of electrophoresis gel complementary strand
2.化学法一Maxam-Gilbert法 本法原理是先将待测DNA片段进行 末端放射性核素标记，然后用专一性的化 学试剂将DNA降解
2. 化学法 — Maxam-Gilbert 法 本法原理是先将待测 DNA 片段进行 末端放射性核素标记，然后用专一性的化 学试剂将 DNA 降解
识别碱基 断裂位置 末端标记
末端标记 识别碱基 断裂位置
MG DNA测序法所需试剂及其作用 Base specificity Base reaction G dimethyl sulphate(硫酸二甲酯)，G断裂 A+G methylation acid(哌啶甲酸)，pH2.0,脱嘌呤 C+T hydrazine(肼)，打开嘧啶环；哌啶去碱基 hydrazine+NaCl(1.5M),只有C与肼反应 A>C 90C,NaOH(1.2M),断裂反应A>C 哌啶(90°C,1M)在修饰位点两端使DNA的糖-磷酸链发生裂解
MG DNA 测序法所需试剂及其作用 Base specificity Base reaction G dimethyl sulphate ( 硫酸二甲酯 ), G断裂 A + G methylation acid ( 哌啶甲酸 ), pH 2.0, 脱嘌呤 C + T hydrazine (肼)，打开嘧啶环；哌啶去碱基 C hydrazine + NaCl ( 1.5 M ),只有C与肼反应 A > C 90°C, NaOH ( 1.2M )， 断裂反应A>C 哌啶（90 °C, 1M) 在修饰位点两端使 DNA 的糖-磷酸链发生裂解
A>C G T+C C
A>C G T+C C