第二章蛋白质研究技术 第一节蛋白质的分离纯化 第二节蛋白质的鉴定 第三节蛋白质的检测 第四节蛋白质的结构分析 华中农业大学生物化学精品课程组 yangzq@mail.hzau.edu.cn
第二章 蛋白质研究技术 第一节 蛋白质的分离纯化 第二节 蛋白质的鉴定 第三节 蛋白质的检测 第四节 蛋白质的结构分析
第一节蛋白质的分离与纯化 一、蛋白质分离纯化的基本原则 二、蛋白质分离纯化的方法
第一节 蛋白质的分离与纯化 一、蛋白质分离纯化的基本原则 二、蛋白质分离纯化的方法
一、蛋白质分离纯化的基本原则 1、选择丰度高、便于提前的材料 2、了解目的蛋白质的稳定性 3、探索有效的抽提法和浓缩法 4、建立一套层析的组合 5、以较好的方法贮存
一、蛋白质分离纯化的基本原则 1、选择丰度高、便于提前的材料 2、了解目的蛋白质的稳定性 3、探索有效的抽提法和浓缩法 4、建立一套层析的组合 5、以较好的方法贮存
蛋白质分离纯化的方法 粗提： ①盐析 ③有机溶剂沉淀 ②结晶 ④等电点沉淀 精提： ①离心(centrifugation) ②电泳(electrophoresis) ③层析(chromatography)
一、蛋白质分离纯化的方法 粗提： ① 盐 析 ③ 有机溶剂沉淀 ② 结 晶 ④ 等电点沉淀 精提 ： ① 离心（centrifugation ） ② 电泳（electrophoresis ） ③ 层析（chromatography ）
离心(centrifugation) 原理：悬液中的各种粒子（细胞，细胞器及分子） 有不同的质量(mass)或密度(density),因此在离 场中有不同沉降速率。 ·不同的蛋白质分子量差别很大，但密度差别很小。 蛋白质的平均密度是1.37gcm3。除非蛋白质结合 了脂或碳水化合物，蛋白质之间密度的差异不会超 过15%。 ·离心力由转子中心到蛋白质界面的距离来决定
① 离心（centrifugation） 原理：悬液中的各种粒子（细胞，细胞器及分子） 有不同的质量（mass）或密度（density），因此在离 场中有不同沉降速率。 不同的蛋白质分子量差别很大，但密度差别很小。 蛋白质的平均密度是 1.37 g/cm3。 除非蛋白质结合 了脂或碳水化合物，蛋白质之间密度的差异不会超 过 15%。 离心力由转子中心到蛋白质界面的距离来决定