國社 课程负责人刘海斌 运动生物化学实验指导 实验一实验基本技术操作 一、实验目的 (一)了解实验室规则及注意事项。 (二)学习运动生物化学实验常用仪器的使用及清洗方法。 (三)学习721型分光光度计的使用方法。 二、实验原理 运动生物化学是研究人体运动时体内的化学变化。运动生物化学的实验方法 基本上是化学的方法，用定量及定性的分析方法来观察机体内物质代谢的规律， 所以实验时必须做到定性的洁净及定量的精确，因此实验取样要准确、样品要无 污染。 对于相同物质和相同波长的单色光来说，溶液的光密度和溶液的浓度呈正 比，配制各种浓度的Cu$0,溶液，然后在780nm波长下比色，测定各种浓度的CuS0, 溶液吸光度值，并制作曲线图 三、实验器材 试管、CuS0,溶液、蒸馏水、721分光光度计、移液管、吸耳球等。 四、实验步骤 (一)玻璃仪器的清洗。 (二)使用移液管的移液操作及721分光光度计的使用。 取4支大试管，编号，按表7-1进行操作： 表7-1CuS0,溶液的测定 空白试管1试2试价3 CuS0,洛波(ml) 0 1.0 2.0 3.0 蒸馏水(1) 40 3.02.0 1.0 充分混匀后，以空白管调零，780m波长比色
⑤鞋 课程负责人刘海斌 以CuS04溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，将3种不同浓度的CuS04 溶液的光密度值分别点在坐标纸上，通过3点绘制成曲线图，并对实验结果进行 分析。 五、注意事项 (一)玻璃仪器清洗后注意检查，管壁不能留有水珠 (二)使用移液管吸取液体时一定要缓慢平稳，不要太快、太猛。 六、作业与思考 (一)玻璃仪器的清洗有哪些基本要求？ 实验二血红蛋白的测定 血红蛋白(b)是红细胞中的一种重要蛋白质，1分子的b是由4分子的 亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。 b的主要生理功能是运输氧气(02)、二氧化碳(C02)和对酸性物质(+)》 起缓冲作用，参与体内的酸碱平衡调节。运动时机体需氧增加，故血红蛋白增加， 有利于为组织提供氧气，促进物质的有氧代谢和带走C02,而且也能起中和酸性 的作用。如果血红蛋白下降，氧供应减少，影响运动能力。 运动员安静时血红蛋白值与正常人没有明显差异。一般人b的正常值男性 为120-160g/L:女性110-150g/L。临床上常用判断贫血的标准，即成年男性低 于120g/L:成年女性低于110g/L:而14岁以下的少年、儿童，不论男女，均 以低于120g/L作为贫血。 血红蛋白的含量与运动员的身体机能状态、训练水平、运动负荷等关系密切， 因此血红蛋白的含量高低直接影响运动员的身体机能和运动能力，尤其对耐力运 动员的专项素质能力。运动员在大运动量开始时，血红蛋白浓度出现明显下降 经过一段时间训练后，运动员身体机能逐渐适应大运动量训练，血红蛋白逐渐回 升。若训练一个阶段后b水平仍未回升或还有继续下降的趋势，应及时注意调 整运动量，并加强营养补充。因此，定期测定b的含量，有助于了解运动员的 对负荷的适应、身体机能水平及营养状态等情况， 一、实验目的 (一)学习取微量血的方法及血样的处理
因数 课程负责人刘海斌 (二)掌握血红蛋白的测定方法。 (三)掌握运动训练中血红蛋白指标应用的评价及价值 (四)巩固721分光光度计的使用方法。 二、实验原理（高铁氰化钾法） 血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子结合成 棕红色氰化高铁血红蛋白。氰化高铁血红蛋白在540m处有一个吸收峰，通过比 色可以测定其光密度值，从而计算出血红蛋白浓度。 氰化高铁血红蛋白测定法是国际血液学标准化学委员会确定的检测血红蛋 白含量的标准方法 三、实验器材 (一)氰化高铁血红蛋白稀释液：高铁氰化钾0.2g、氰化御0.05g、磷酸二 氢钾0.12g,用蒸馏水溶解并稀释至1000ml,置于棕色瓶中，瓶口塞紧后保行于 冷暗处或冰箱，注意不能冷冻，至少可稳定1个月。 (二)氰化高铁血红蛋白标淮液：（试剂盒）。 (三)95%酒精、75%酒精。 (四)一次性采血针、吸血管、棉球、试管、移液管、吸耳球、721分光光 度计等。 四、实验步骤 取3支大试管编号，按表7-2进行操作。 表7-2血红蛋白的测定 空白怜标准管测定铃 氯化高铁血蛋白稀释液(m1) 5.0 5.0 5.0 新鲜手指血(m1) 0.02 氧化高铁血红蛋白标准液(ml) 0.02 充分混匀后，放置3ai,以空白管调零， 在540m波长处比色，读取测定管及标准管光密度0m值 对实验结果进行计算，并分析讨论。 血红蛋白(g%)=OD测/OD标XC标 五、注意事项
國鞋 课程负责人刘海斌 (一)试剂含有氰化物，为剧毒药品，配制和保存时必须严格注意安全。实 验后一定要洗手，并注意药品的处理，不能乱倒。 (二)取血部位对血红蛋白测定结果有很大影响，最好取手指血测定血红蛋 白。同时，取血时注意擦干、消毒采血部位，用自然流出的第二滴血。最好固定 采血部位。 (三)一次性采血针应一人一针，严防交叉感染。 六、作业与思考 (一)运动训练对血红蛋白含量有何影响？ (二)在训练周期中如何运用血红蛋白指标来评定？ 实验三血尿素的测定 尿素是体内蛋白质、氨基酸分解代谢的终产物，体内蛋白质和氨基酸分解代 谢产生氨，氨代谢的主要去路是在肝脏合成尿素后释放进入血液，然后经血液循 环至肾脏排出体外。 正常生理活动时，尿素的生成和排泄处于平衡状态，使血尿素浓度保持相对 稳定。正常人血尿素安静值为3.2~7.0mol/L。运动员的安静值与普通人一致 一般在30min以内运动时，血尿素变化不大，超过30min以上的运动蛋白质和氨 基酸分解代谢加强参与供能，尿素生成增多，血尿素含量也较明显增加。身体对 运动负荷的适应性越差，运动时生成的尿素就越多。在训练期可每天或隔天、或 大运动量训练后次日晨测定血尿素，来评定运动员身体机能状况：也可测定每周 一晨的血尿素以了解机体的恢复情况。所以，血尿素氮可作为评定运动负荷量、 机能状况及机体疲劳程度的重要指标。 一、实验目的 (一)学习血尿素氮的测定方法，熟练微量血的采集技术。 (二)掌程血尿素氨指标在运动实践中的应用。 (三)学习离心机的使用方法 二、实验原理
國社 课程负责人刘海斌 在强酸性的条件下，去蛋白血滤液中的尿素与二乙酰一肟和硫氨脲共热，生 成粉红色的二嗪化衍生物，其颜色深浅在一定范围内与尿素含量成正比，通过与 同样处理的尿素氯标准溶液比色，可求出血尿素氯的含量。 三、实验器材 (一)1%氟化钠溶液。 (二)10%三氯乙酸溶液。 (三)二乙酰一肟-硫氨脲溶液：称取二乙酰一肟600mg,硫氨脲30mg,加 蒸馏水溶解并加至100ml,置棕色瓶中，冰箱保存。 (四)尿素氯标准贮存液(1mg/ml):精确称取干燥分析纯尿素0.2143g, 用112S04溶解并稀释100mL,冰箱保存。 (五)尿素氮标准应用液(0.01mg/mL):准确取标准贮存液1mL,加1H2S04 稀释至100mL。 (六)混合酸液：浓磷酸(85%^87%)3.5mL、浓硫酸8ml,慢慢滴加于80ml 水中，冷却加水至100ml。 (七)空白液：取1份1aF液和3份10%的三氯乙酸混合而成。 (八)一次性采血针、吸血管、消毒棉球、试管、移液管、吸耳球、水浴箱 离心管、离心机、721分光光度计等。 四、实验步骤 (一)制备无蛋白血滤液：取2支离心管，按表3-1操作。 取指尖血0.02mL,立即置于含1%氟化钠0.48ml的离心管中，加入10%三氯 醋酸1.5mL,充分摇匀。立即以3000r/min的转速离心15min,分离血清。 表T-3无蛋白血滤液的制备 高心脊 1Nf溶液(ml) 0.48 新鲜手指血(n) 0.02 立刻摇匀 10%三氛乙酸(l 15 充分混匀，离心5min(3000r/min),将上清液倒入另一离心管中 (二)取3支大试管，标明“空白管”、“标准管”、“测定管”，按表 3-2操作。 表7-4血尿索氨的测定