包涵体直径约0.5-1um，具有很高的密度（约1.3mg/ml），相差显微镜下有折光性，呈非水溶性，只溶于高浓度变性剂如尿素、盐酸胍等。InclustonbodyHomogenate from FrenchE.coliwithscFv57Ppress before incubation oneinclusion bodieshourtodegradeDNAandcell wall material
◼ 包涵体直径约0.5-1μm，具有很高的密度（约1.3 mg/ml），相差显微镜下有折光 性，呈非水溶性，只溶于高浓度变性剂如尿素、盐酸胍等
包涵体加工流程机械破碎法细胞破碎包涵-IB体提取离心包涵体分离1喜Dissolved去除细胞碎片包涵体洗涤1(膜蛋白和脂类等）包涵体溶解Refolding83体外复性如何对包涵体蛋白进行高效体外复性以获得活性产品是生物工程产业化经常面临的一个难题
包涵体加工流程 离心 去除细胞碎片 （ 膜蛋白和脂类等） 机械破碎法 包涵 体 提 取 ◼ 如何对包涵体蛋白进行高效体外复性以获得活性产品是生物工程产 业化经常面临的一个难题
包涵体的洗涤为除去包涵体上粘附的杂质，应用洗涤液洗涤包涵体沉淀（如常用去污剂TritonX-100或脱氧胆酸钠和低浓度变性剂2mol/L尿素或盐酸胍等，洗涤以除去脂类和膜蛋白如：50mMTris-HCl，pH7.0-8.5，2M尿素，1mMEDTA
包涵体的洗涤 • 为除去包涵体上粘附的杂质，应用洗涤液洗涤包涵体沉淀 • 常用去污剂Triton X-l00或脱氧胆酸钠和低浓度变性剂（如 2mol/L尿素或盐酸胍等，洗涤以除去脂类和膜蛋白。 • 如：50mM Tris-HCl， pH7.0-8.5， 2M尿素，1mM EDTA
包涵体的溶解大多数在pH8的条件下，用强变性剂如8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍，打断包涵体蛋白质分子内和分子间的各种化学键，使多肽伸展对于含有S-S的蛋白质，分离的包涵体中通常含有一些链间形成的二硫键和链内的非活性二硫键一为将包涵体充分溶解，需加入还原剂（如二硫苏糖醇DTTGSH、β一疏基乙醇β-ME）打开蛋白质中所有二硫键，一般是50-100mMβ-ME或DTT（对于目标蛋白没有二硫键的有时也应使用还原剂，因为含S-S的杂蛋白会影响包涵体的溶解）同时还应加入金属螯合剂，如EDTA，用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子，防止已经处于还原状态的SH-与之发生氧化反应包涵体溶解后，蛋白质成为失去了生物学活性伸展肽链
包涵体的溶解 • 大多数在pH8的条件下，用强变性剂如8mol/L尿素、 6mol/L盐酸胍， 打断包涵体蛋白质分子内和分子间的各种化学键，使多肽伸展 ◼ 对于含有S-S的蛋白质，分离的包涵体中通常含有一些链间形成 的二硫键和链内的非活性二硫键 ◼ →为将包涵体充分溶解，需加入还原剂（如二硫苏糖醇DTT、 GSH、β－巯基乙醇 β-ME）打开蛋白质中所有二硫键，一般是 50-100mM β-ME或DTT（对于目标蛋白没有二硫键的有时也应 使用还原剂，因为含S-S的杂蛋白会影响包涵体的溶解） ◼ 同时还应加入金属螯合剂，如EDTA，用来螯合Cu2+ 、Fe3+等金 属离子，防止已经处于还原状态的SH-与之发生氧化反应。 包涵体溶解后，蛋白质成为失去了生物学活性伸展肽链