裂解途径 bacO Lytic cyclo nu 22 st chro
21 裂解途径
(三)，粘粒(cosmid vector) (30-50kb 是将质粒和噬菌体改建的一种载体.它含 COS序列，插入一小plasmid-而得名 Cosmid。改建后的粘粒含有，噬菌体的复 制起点和cos末端。全长8kb。大片段外 源DNA插入后，在体外包装进而被克隆。 可包装3050kb长的DNA片段，多用于基 因文库构建
22 （三）.粘粒(cosmid vector) （30~50kb） 是将质粒和λ噬菌体改建的一种载体.它含 COS序列,插入一小plasmid –而得名 Cosmid。改建后的粘粒含有λ噬菌体的复 制起点和cos 末端。全长8kb。大片段外 源DNA插入后，在体外包装进而被克隆。 可包装30~50 kb长的DNA片段，多用于基 因文库构建
(四)大片段DNA克隆载体 。人类和哺乳动物的基因组很大，甚 至许多单个基因也相当大（如： DMD gene2300kb),克隆分析就 需要更大的基因载体。如近年来构 建的一些载体：BAC,PI,YAC等
23 (四) 大片段DNA克隆载体 ⚫ 人类和哺乳动物的基因组很大，甚 至许多单个基因也相当大（如： DMD gene 2300kb），克隆分析就 需要更大的基因载体。如近年来构 建的一些载体：BAC，PI，YAC等
1、细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC) ● 优点：能携带大片段DNA, T7 promoter Sp6 promoter 约300kb。 BamHl /Not 在每个细胞中，一个载体 分子能繁殖多个拷贝，高 产DNA。 ● 缺点：会出现插入片段在 结构上的不稳定，导致克 隆DNA部分的缺失或重排。 ·为克服上述缺点，人们采 用低拷贝数复制子载体， 如，E coli中的F因子。此 质粒含有2种基因(part A, part B)。每个E coli能接 受>300 kbDNA片段
24 1、细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome,BAC） ⚫ 优点：能携带大片段DNA， 约300kb。 在每个细胞中，一个载体 分子能繁殖多个拷贝，高 产DNA。 ⚫ 缺点：会出现插入片段在 结构上的不稳定，导致克 隆DNA部分的缺失或重排。 ⚫ 为克服上述缺点，人们采 用低拷贝数复制子载体， 如，E coli中的F因子。此 质粒含有2种基因（part A, part B）。每个E coli能接 受 >300kbDNA片段
2、噬菌体PI载体和PAC ·PI噬菌体与入噬菌体一样，外有蛋白质壳。 内含相当大的(110~115kb)线性DNA, 并在体外包装于PI壳内。PI进入宿主细 胞后环化，扩增。 ●1994年，有人将PI和F因子克隆结合产生 PI人工染色体克隆系统--PAC
25 2、噬菌体PI载体和PAC ⚫ PI噬菌体与λ噬菌体一样，外有蛋白质壳。 内含相当大的（110~115kb）线性DNA， 并在体外包装于PI壳内。PI进入宿主细 胞后环化，扩增。 ⚫ 1994年，有人将PI和F因子克隆结合产生 PI人工染色体克隆系统-----PAC