·载体具以下特征： 1)分子量小，便于携带较大的DNA片段，能进入宿 主细胞并在其中增殖： 2)有多种限制酶切点，每种限制酶最好只有单一切点； 3)被切割后的载体，插入外源DNA后，不影响其复 制能力，并有可选择的标记基因（如，抗药基因)。 ·常用的载体：质粒，入噬菌体，粘粒，BAC,YAC, PI等
16 ⚫ 载体具以下特征： 1)分子量小，便于携带较大的DNA片段，能进入宿 主细胞并在其中增殖； 2)有多种限制酶切点，每种限制酶最好只有单一切点； 3)被切割后的载体，插入外源DNA后，不影响其复 制能力，并有可选择的标记基因（如，抗药基因）。 ⚫ 常用的载体：质粒，λ噬菌体，粘粒，BAC，YAC， PI等
(一)质粒plasmid Plasmid独立于细菌染色体外的双链环DNA分子。 PBR322 大肠杆菌 pSC101 Plasmid chromosome COIEI plasmid 革兰氏阴性菌了pcl94 Lscp12 真核生物-酵母质粒
17 （一）质粒 plasmid Plasmid 独立于细菌染色体外的双链环DNA分子。 PBR322 大肠杆菌 pSC101 Plasmid chromosome COIEI plasmid 革兰氏阴性菌 pc194 scp12 真核生物-酵母质粒
常用的质粒如pUC19,多连接子MCS。插入外源基因片 段长度约10kb。将外源基因插入到MCS中，随质粒的表达 而表达，增殖而扩增。外源基因插入到MCS后，B-半乳糖 苷酶的活性丧失而不显兰色一白色菌落。如果不插入外源 基因，则产生兰色色。从而筛选阳性菌落 EcoRI Hindlll LacZ pUC19 Ori复制起 点 APR
18 常用的质粒如pUC19，多连接子MCS。插入外源基因片 段长度约10kb。将外源基因插入到MCS中，随质粒的表达 而表达，增殖而扩增。外源基因插入到MCS后，β-半乳糖 苷酶的活性丧失而不显兰色-白色菌落。如果不插入外源 基因，则产生兰色色。从而筛选阳性菌落。 EcoRI HindIII Ori复制起 点 LacZ APR pUC19
(二) .λ-噬菌体(phage) ·是一种可在体外包装的细菌病毒，可高效感染 大肠杆菌.-噬菌体DNA是线状双链DNA分子， 全长约50kb,每条链各带12bp长的单链互补末 端-粘末端(COS序列。进入宿主细胞后不久， C0S序列碱基配对环化。可包装37~52kb DNA分子. ·改建后的噬菌体发展了多种较大型的克隆载 体，如
19 （二）.λ-噬菌体(λphage) ⚫ 是一种可在体外包装的细菌病毒,可高效感染 大肠杆菌.λ-噬菌体DNA是线状双链DNA分子, 全长约50kb,每条链各带12bp长的单链互补末 端-粘末端(COS序列)。进入宿主细胞后不久， COS序列碱基配对环化。可包装37~52kb DNA分子. ⚫ 改建后的λ噬菌体发展了多种较大型的克隆载 体，如：
●置换λ载体~ 溶解途径 载体和外源DNA整合到宿主菌DNA中。 可克隆23kb的外源DNA。 ·插入载体-裂解途径 DNA在宿主细胞中复制，然后包装成 噬菌体，裂解宿主，释放噬菌体。可 克隆5kb的cDNA
20 ⚫ 置换λ载体 – 溶解途径 载体和外源DNA整合到宿主菌DNA中。 可克隆23kb的外源DNA。 ⚫ 插入载体 – 裂解途径 DNA在宿主细胞中复制，然后包装成 噬菌体，裂解宿主，释放噬菌体。可 克隆5kb的cDNA