2-DE数据库 蛋白质分离后可建立2-DE数 据库，用于鉴定和比较 •凝胶图像扫描 •图像加工 斑点检测和定量 •凝胶配比 •数据分析 数据呈递 2-DE数据库建立
2-DE数据库 蛋白质分离后可建立2-DE数 据库，用于鉴定和比较 •凝胶图像扫描 •图像加工 •斑点检测和定量 •凝胶配比 •数据分析 •数据呈递 •2-DE数据库建立
(二)质谱技术 2-DE分离的蛋白经切胶回收、酶解后进行质谱分析 质谱测序：将蛋白肽链打碎电离， Edman测序：将蛋白肽链逐步化 通过测定分子碎片的荷质比，推 学解聚，色谱鉴定酶解下来的氨 算出氨基酸组成和序列 基酸，反推氨基酸序列 蛋白切胶 胰蛋白酶 肽段打质 回收 酶解 谱 OH 专家系统 、 苯乙内硫 PTH 虚拟质谱 虚拟酶解 蛋白质数 据库
（二）质谱技术 2-DE分离的蛋白经切胶回收、酶解后进行质谱分析 Edman测序：将蛋白肽链逐步化 学解聚，色谱鉴定酶解下来的氨 基酸，反推氨基酸序列 质谱测序：将蛋白肽链打碎电离， 通过测定分子碎片的荷质比，推 算出氨基酸组成和序列 蛋白切胶 回收 胰蛋白酶 酶解 肽段打质 谱 专家系统 比对 蛋白质数 据库 虚拟质谱 虚拟酶解
质谱原理 数据及供电系统 分子电离与荷质比 进样系统 离子源 质量分析器 检测接收器 利用离子化的带电物体在磁场 中的行为确定其分子量，利用 真空系统 这些质量信息对分子进行鉴定。 sample source analyzer detector inlet 接收器 离子源 e.g.,electron e.g,ESI,El,or e.g..quadrupoles or time-of-llight multiplier MALDI vacuum vacuum 氮离子 轻离子 pumps pumps 重离子 Intensity 风香遂g spectrum 磁场
质谱原理 分子电离与荷质比 利用离子化的带电物体在磁场 中的行为确定其分子量，利用 这些质量信息对分子进行鉴定
蛋白质谱 传统硬电离方式的缺点 •高能电子轰击破坏化学键，产生复杂的分子碎 片 ·一个蛋白质分子硬电离后可产生10000种以上 的不同的信号峰，导致数据庞杂无法分析 软电离方式 337 nm UV laser •极强激光脉冲激发释放大分子 Fluid(no salt) 离子(MALDI) 00 000。 •极强电场推动大分子直接喷射 (ESI cyano-hydroxy Gold tip needle cinnamic acid MALDI ESI
蛋白质谱 传统硬电离方式的缺点 •高能电子轰击破坏化学键，产生复杂的分子碎 片 •一个蛋白质分子硬电离后可产生10000种以上 的不同的信号峰，导致数据庞杂无法分析 软电离方式 •极强激光脉冲激发释放大分子 离子（MALDI） •极强电场推动大分子直接喷射 （ESI）