成都大亭 CHENGDU UNIVERSITY 为1份自尊 确定目的基因的基本流程? 出发菌 目标物生物合成通路是否清晰 全基因组测序 转座子随机插入突变 性 菌 定位基团簇 株 构建突变子库 确定目的基因 CHENGDU UNⅣ ERSITY
出发菌 YES 目标物生物合成通路是否清晰 NO 全基因组测序 转座子随机插入突变 构建突变子库 阳 性 菌 定位基团簇 株 确定目的基因 确定目的基因的基本流程？
成都大亭 CHENGDU UNIVERSITY 为1份自尊 目标物生物合成通路已知 查询其代谢通路— KEGG PATHWAY NHCH HO HN HO HN H N hN O NH, ger H-N HO O HO HO CH, HO、A CH H. CHNOH H, CHN OH Gentamicin X2 J-20A Sagamicin Cht由图可知,genQ为我 C1JH3NOa(48226) C1H3N2O4(481.27) C3H1N2O(463.30) H, C H,CHN CH 们的目的基因。 H N H, nH HO O HO O HO O 0CH CH HO H, CHN OH H CHN OH H CHNOH G418 J-20B C2HNO3(496.27) C3H1N2O3(495.29 C2HNO3(477.32) 图1庆大霉素的部分生物合成途径 Figure 1 The partial biosynthesis pathway of gentamicin CHENGDU UNⅣ ERSITY
一、查询其代谢通路——KEGG PATHWAY 目标物生物合成通路已知 由图可知，genQ为我 们的目的基因
成都大亭 CHENGDU UNIVERSITY 为1份自尊 目标物生物合成通路不明确 情况:若通过育种得到一株产活性产物∫产物被鉴定岀,但其生物合成途 径尚不完全明确)的菌株 转座子随机 插入突变 筛选 阳性菌株 基因测序 定位基团 明确机制 产量验证 回复突变 CHENGDU UNⅣ ERSITY
情况：若通过育种得到一株产活性产物（产物被鉴定出，但其生物合成途 径尚不完全明确）的菌株 转座子随机 插入突变 筛选 阳性菌株 基因测序 定位基团 明确机制 产量验证 回复突变 目标物生物合成通路不明确
成都大亭 CHENGDU UNIVERSITY 为1份自尊 转座子随机插入突变 转座子( Transposable Element, or transposon) 转座因子或跳跃因子,它可以从遗传物质的一部分跳跃到另一部分, 从而引起遗传变异。 CHENGDU UNIVERSITY
转座子随机插入突变 转座子（Transposable Element , or transposon）： 转座因子或跳跃因子，它可以从遗传物质的一部分跳跃到另一部分， 从而引起遗传变异
成都大亭 CHENGDU UNIVERSITY 为1份自尊 Tn5转座子: 核心序列:编码三个抗生素(新霉素、博莱霉素、链霉素); 两个倒置的50:1S50R编码53KD的Tnp和48KD的转座阻過蛋台 nh),两者使用同一阅读框,但启动子不同。S50L的第1442减基处 存在一个赭石突变(UAA,S50具有19bp的倒置末端,二者有7个碱 基不相同,是转座酶(Tnp)的作用位点。 突变位点 Mutation site OE OE ISSOL kan strr bleo' ISoR P3 PI(Tnp P4 P2 (Inh) CHENGDU UNⅣ ERSITY
kanr strr bleor OE IE IE OE IS50L IS50R P1 (Tnp) P2 (Inh) P3 P4 突变位点(Mutation site) Tn5转座子： 核心序列：编码三个抗生素(新霉素、博莱霉素、链霉素)； 两个倒置的IS50：IS50R编码53KD的Tnp和48KD的转座阻遏蛋白 (Inh),两者使用同一阅读框，但启动子不同。IS50L的第1442碱基处 存在一个赭石突变(UAA)，IS50具有19bp的倒置末端，二者有7个碱 基不相同，是转座酶(Tnp)的作用位点