图4-1三种梯度形式示意图 a:线性梯度b:凸形梯度c:凹形梯度 图4-2梯度混合器示意图 A:混合室B:贮液室 电磁搅拌器○阀门 ◆窝心后形成不同大小不同形状、具有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度溶液中形成 若干条界面清楚的不连续区带。 4.23等密梯度离心 ◆当欲分离的不同颗粒的密度范围处于离心介质的密度范围内时,在离心力的作用下 不同浮力密度的颗粒或向下沉降,或向上飘浮,只要时间足够长,就可以一直移动到与它们 各自的浮力密度恰好相等的位置(等密度点),形成区带。这种方法称为等密梯度离心,或 称为平衡等密度离心。 ◆等密梯度离心常用的离心介质是铯盐,如氯化铯(CsC)、硫酸铯(CS2SO4)、溴化 铯(CsBr)等。有时也可以采用三碘苯的衍生物作为离心介质。 11
11 a b c 图 4-1 三种梯度形式示意图 a:线性梯度 b:凸形梯度 c:凹形梯度 B A a b 图 4-2 梯度混合器示意图 A:混合室 B:贮液室 电磁搅拌器 阀门 ◆离心后形成不同大小不同形状、具有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度溶液中形成 若干条界面清楚的不连续区带。 4.2.3 等密梯度离心： ◆当欲分离的不同颗粒的密度范围处于离心介质的密度范围内时，在离心力的作用下， 不同浮力密度的颗粒或向下沉降，或向上飘浮，只要时间足够长，就可以一直移动到与它们 各自的浮力密度恰好相等的位置（等密度点），形成区带。这种方法称为等密梯度离心，或 称为平衡等密度离心。 ◆等密梯度离心常用的离心介质是铯盐，如氯化铯（CsCl）、硫酸铯（Cs2SO4）、溴化 铯（CsBr）等。有时也可以采用三碘苯的衍生物作为离心介质。 C C
4.3离心条件的确天 ◆选择好离心力(或离心速度)和离心时间 4.31离心力 ◆低速离心般可以用离心速度,即转子每分钟的转数表示。如5000r/min等。 ◆在高速离心,特别是超速离心时,往往以相对离心力(RCF)表示。如60000×g等。 ◆相对离心力是指颗粒所受到的离心力与地心引力之比值。即: RCF= =1.12×10°·n·r F 式中:RCF相对离心力(xg) Fc:离心力 Fg:地心引力 n:转子每分钟转数(r/min) r:旋转半径(cm) 432离心时间 ◆对于常速离心、高速离心和差速离心来说,离心时间是指颗粒从离心管中样品液的液 面完全沉降到离心管底的时间,称为沉降时间或澄清时间; ◆对于密度梯度离心而言,离心时间是指形成界限分明的区带的时间,称为区带形成时 等密梯度离心所需的离心时间是指颗粒完全达到等密度点的平衡时间,称为平衡时 ◆最常用到的是沉降时间。 沉降时间是指颗粒从样品液面完全沉降到离心管底所需的时间。沉降时间决定于颗粒的
12 4.3 离心条件的确定 ◆选择好离心力（或离心速度）和离心时间。 4.3.1 离心力： ◆低速离心一般可以用离心速度，即转子每分钟的转数表示。如 5000r/min 等。 ◆在高速离心，特别是超速离心时，往往以相对离心力（RCF）表示。如 60000×g 等。 ◆相对离心力是指颗粒所受到的离心力与地心引力之比值。即： Fc RCF = —— = 1.12×10-5·n 2·r Fg 式中: RCF:相对离心力 (×g) Fc：离心力 Fg：地心引力 n: 转子每分钟转数 (r/min) r: 旋转半径 (cm) 4.3.2 离心时间： ◆对于常速离心、高速离心和差速离心来说，离心时间是指颗粒从离心管中样品液的液 面完全沉降到离心管底的时间，称为沉降时间或澄清时间； ◆对于密度梯度离心而言，离心时间是指形成界限分明的区带的时间，称为区带形成时 间； ◆等密梯度离心所需的离心时间是指颗粒完全达到等密度点的平衡时间，称为平衡时 间。 ◆最常用到的是沉降时间。 沉降时间是指颗粒从样品液面完全沉降到离心管底所需的时间。沉降时间决定于颗粒的